人和动物的组织细胞要实现在体外的器皿中培养，必须将取自人体和动物的生物材料制备成可培养的细胞。实验室常用的培养细胞有原代培养细胞、二倍体细胞和传代细胞。后两类细胞是有限传代细胞和无限传代细胞，是前人在细胞制备和培养过程中选育出来的传代细胞系（或株）。

一、原代细胞培养

原代培养（primary culture）是从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养，是获取细胞的主要手段，也是建立各种细胞系的第一步。由于原代培养的细胞是刚刚离开机体，生物学特性尚未发生很大变化，仍具有二倍体遗传特性，最接近和反映体内生长特性，很适合做药物测试，细胞分化等试验研究；但另一方面，因原代培养的组织来源于动物的某个部位，其组织是由多种细胞组成，成分性质复杂，即使生长出同一类型细胞，如成纤维样细胞或上皮样细胞，细胞间也存在很大的差异。如供体不同，即使组织类型和部位相同，个体差异也可在细胞上反映出来，因而原代培养细胞的部分生物学特征尚不稳定，如要做较为严格的对比实验研究，还需对细胞进行短期传代培养后方可进行。但原代培养细胞的传代是有限的，即使是经过短期传代，细胞也会逐渐退化和衰老。

（一）组织块培养法

组织块培养是一种简易且成功率较高的原代培养方法，即将组织剪成小块后接种于培养瓶内培养。

【材料】

1．组织来源动物内脏或实体瘤；

2．含小牛血清的培养液无血清培养液、Hanks液等；

3．器具培养瓶、弯头吸管、小烧杯、眼科剪、镊、培养皿等。

【方法】

1．动物消毒后，按部位剪下所需要的脏器或肿瘤组织，放置在无菌的平皿内，倒入少许无血清培养液或Hanks液漂洗组织，洗净后吸除漂洗液后进行修剪，将组织剪或切成 1 mm³,左右的小块。

2．用眼科镊将剪切好的组织块夹送到培养瓶内，再用弯头吸管将组织块在瓶底壁上均匀摆放好，使每小块间距为5mm左右，组织块的数量不要过多，如50m1培养瓶放置20～30块组织为宜。如果在培养瓶内有盖玻片，要在其上也放置几块。组织块放好后将培养瓶轻轻翻转，让瓶底朝上，慢慢沿瓶壁向瓶内注入适量培养液，盖好瓶盖。将培养瓶倾斜放置在37℃孵箱内（不要让瓶底上的组织块碰到培养液）孵育2～4小时。

3．待组织块经放置片刻后能贴牢于瓶底，将培养瓶缓慢翻转平放，让培养液缓缓覆盖组织块；组织块培养也可不用翻转法，即在摆放好组织块后，仅向培养瓶内加入少量培养液，起到能湿润组织块的作用即可。盖好瓶盖，置温箱内培养4～24小时后再补加培养液，让培养液覆盖组织块进行培养。

【结果】

组织块接种培养1～3天后，游出的细胞数很少，在观察时要动作轻巧。培养2～4周时，在倒置显微镜下可见组织块周围有多边形上皮样细胞和长梭形成纤维细胞移出生长，此时应保留需建系的细胞，去除另一种细胞。经1～2个月后细胞形成单层并逐渐扩大范围。当单层细胞占据1/3～1/2瓶底时，可考虑传代。

【注意事项】

1．组织块的粘贴不牢固，除在观察和移动时要动作轻巧，以防振动液体产生冲力致粘贴不牢的组织块漂起，造成原代培养失败外，还可预先在培养瓶或培养皿的底壁上涂放一薄层血清或鼠尾胶原等，以增加粘合力。

2．在原代培养的1～2天内要特别注意观察培养物有无污染，一旦发现有细菌或真菌的污染要及时清除，若清除不利或有困难，应及时将其培养物拿出培养箱，以防污染到培养箱内的其他培养物。

3．以培养目的要求，如果是培养上皮细胞建系，要及时和反复地刮除过度生长的成纤维细胞，注意不要损伤到上皮细胞。另外，要应用适合上皮细胞生长的无血清或低浓度血清的培养基，保持pH 6.8～7.0左右，用换液的方法进行调整。