亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用福柱还原法测定。

(一)测定原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸盐总量，由测得的亚硝酸盐总量减去试样中亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。

(二)试剂和仪器

1．试剂

(1)亚铁氰化钾溶液(106g/L)称取106.0g亚铁氰化钾[K₄Fe(CN)₆·3H₂O],用水溶解并稀释至1000 mL。

(2)乙酸锌溶液(220g/L) 称取220.0g乙酸锌[Zn(CH₃COO)₂·2H₂O]，加30mL冰乙酸溶于水并稀释至1000mL。

(3)饱和硼砂溶液(50g/L)称取50g硼酸钠(Na₂B₄O₇·10H₂O) ,溶于100mL热水中，冷却后备用。

(4)氨缓冲溶液(pH 9.6～9.7)量取30mL盐酸，100mL水，混匀后加65 mL氨水，再加水稀释至1000 mL，混匀。

(5)氨缓冲液的稀释液量取50mL pH 9.6～9.7氨缓冲溶液，加水稀释至500 mL ,混匀。

(6)盐酸(0.1mol/L)量取8.3mL盐酸，用水稀释至1000mL。

(7)盐酸(2mol/L)量取167mL盐酸，用水稀释至1000 mL。

(8)盐酸溶液(20%)量取20mL盐酸，用水稀释至100mL。

(9)对氨基苯磺酸溶液(4g/L)称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100mL 20％盐酸中，混匀，置棕色瓶中，避光保存。

(10)盐酸萘乙二胺溶液(2g/L)称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

(11)硫酸铜溶液(20g/L)称取20g 酸铜，加水溶解，并稀释至1000mL。

(12)硫酸镉溶液(40g/L)称取40 硫酸镉，加水溶解，并稀释至1000mL。

(13)乙酸溶液(3%)量取冰乙酸3 mL于100 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀。

(14)亚硝酸钠标准溶液(200 ug/mL，以亚硝酸钠计)准确称取0.1000g于110～120℃干燥恒重的亚硝酸钠标准品，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

(15)硝酸钠标准溶液(200ug/mL，以亚硝酸钠计)准确称取0.1232g于110～120℃干燥恒重的硝酸钠标准品，加水溶解，移于500mL容量瓶中，并稀释至刻度。

(16)亚硝酸钠标准使用液(5.0ug/mL)临用前，吸取2.50mL亚硝酸钠标准溶液，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

(17)硝酸钠标准使用液(5.0ug/mL)临用前，吸取2.50mL硝酸钠标准溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

2．仪器

(1)天平感量为0.1mg和1mg。

(2)组织捣碎机、超声波清洗器、恒温干燥箱、分光光度计、镉柱或镀铜镉柱。

①海绵状镉的制备：镉粒直径0.3～0.8 mm。将适量的锌棒放入烧杯中，用40g/L硫酸镉溶液浸没锌棒。在24h之内，不断将锌棒上的海绵状镉轻轻刮下。取出残余锌棒，使镉沉底，倾去上层溶液。用水冲洗海绵状镉2～3次后，将镉转移至搅拌器中，加400 mL盐酸(0.1mol/L),搅拌数秒，以得到所需粒径的镉颗粒。将制得的海绵状锅倒回烧杯中，静置3～4h，期间搅拌数次，以除去气泡。倾去海绵状镉中的溶液，并可按下述方法进行镉粒镀铜。

②镉粒镀铜：将制得的镉粒置锥形瓶中(所用镉粒的量以达到要求的镉柱高度为准)，加足量的盐酸(2 mol/L)浸没镉粒，振荡5min，静置分层，倾去上层溶液，用水多次冲洗镉粒。在N粒中加入20g/L硫酸铜溶液(每克镉粒约需2.5mL)，振荡1min，静置分层，倾去上层溶液后，立即用水冲洗镀铜镉粒(注意镉粒要始终用水浸没)，直至冲洗的水中不再有铜沉淀。

③镉柱的装填：如图3-1所示，用水装满镉柱玻璃柱，并装入约2cm高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下，加入海绵状镉至8～10cm[装置(1)]或15～20cm[装置(2)]，上面用1cm高的玻璃棉覆盖。若使用装置(2)，应在上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。如无镉柱玻璃管时，可以用25 mL酸式滴定管代替，但过柱时要注意始终保持液面在镉层之上。

镉柱填装好后，先用0.1mol/L盐酸25mL洗涤，再以水洗2次，每次25mL镉柱每次使用完毕后，应先以25 mL盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗2次，每次25mL，最后用水

图3-1 镉柱的装填示意图

1-贮液漏斗，内径35 mm，外径37mm2-进液毛细管，内径0.4mm，外径6mm

3-橡皮塞 4-镉柱玻璃管，内径12 mm，外径16 mm 5,7-玻璃棉

6-海绵状镉8-出液毛细管，内径2mm，外径8mm

覆盖镉柱。镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。

④镉柱还原效率的测定：吸取20mL硝酸钠标准使用液，加入5mL氨缓冲液稀释液，混匀后注入贮液漏斗，使其流经镉柱还原，用100mL容量瓶收集洗提液。洗提液的流量不应超过6mL/min，在贮液杯将要排空时，用约15mL水冲洗杯壁。冲洗水流尽后，再用15mL水重复冲洗，第2次冲洗水流尽后，将贮液杯灌满水，并使其以最大流量流过柱子。当容量瓶中的洗提液接近100mL时，从柱子下取出容量瓶，用水定容至刻度，混匀。

取10.0mL还原后的溶液(相当10 ug亚硝酸钠)于50mL比色管中，吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.5、10.0、12.5ug亚硝酸钠)，分别置于50mL带塞比色管中。上述各管中分别加入2 mL 4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3～5 min，各加入1 mL 2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用1 cm比色杯，零管调零，在波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线。根据标准曲线计算测得结果，与加入量一致，还原效率应大于95％为符合要求。还原效率的计算：

式中X—还原效率，％；

m₁—测得亚硝酸钠的含量，ug;

10—测定用溶液相当于亚硝酸钠的含量，ug。

如果还原率小于95％时，将镉柱中的镉粒倒入锥形瓶中，加入足量的盐酸(2moL/L)中，振荡数分钟，再用水反复冲洗。

相关链接：护色剂含量的测定

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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