5 仪器

5.1 液相色谱仪：配有紫外检测器。

5.2 分析天平：感量0.1 mg～0.01g。

5.3 涡旋振荡器。

5.4 冷冻离心机：转速大于5000 r/min。

5.5 固相萃取装置。

5.6 真空泵。

5.7 氮气吹干仪。

5.8 pH计：测量精度±0.02。

5.9 刻度样品管：10mL，精度为0.1 mL。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。

6.2 试样保存

牛奶置于0℃～4℃冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。

7 测定步骤

7.1 提取

牛奶试样称取10g(精确到0.01g)，置于50 mL具塞塑料离心管中。奶粉试样称取2g(精确到0.01g)，置于50 mL具塞塑料离心管中。向试样中加入20 mL 0.1mol/L Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(4.10)，于涡旋振荡器上混合2 min，于10℃,5000 r/min离心10 min，上清液过滤至另一离心管中。残渣中再加入20 mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液。

7.2 净化

将上清液(7.1)通过处理好的Oasis HLB柱(4.17)，待上清液完全流出后，用5 mL甲醇-水(4.12)淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5 min，最后用5 mL甲醇(4.1)洗脱，收集洗脱液于10 mL样品管中。

将收集的洗脱液通过羧酸型阳离子交换柱(4.18)，待洗脱液全部流出后，用5 mL甲醇(4.1)洗柱，减压抽干，用4 mL 0.01mol/L草酸-乙腈溶液(4.13)洗脱，收集洗脱液于10 mL样品管中，45℃氮气吹至1.5 mL左右，流动相定容至2 mL，供液相色谱-紫外检测器测定。

7.3 测定条件

7.3.1 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：Kromasil 100-5C₁₈, 5 um,150 mm×4.6 mm(内径)或相当者；

b)流动相：0.01 mol/L草酸溶液-乙腈-甲醇(77+18+5);

c)流速：1.0 mL/min;

d)柱温：40℃；

e)检测波长：350 nm;

f)进样量：60 uL。

7.3.2 液相色谱测定

将混合标准工作溶液(4.16)分别进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时间分别为3.09min、3.73 min、8.27 min和12.53 min。

相关链接：牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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