1 范围

GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中红霉素残留量的杯碟测定方法。

本部分适用于各种蜂蜜中红霉素残留量的测定。

本部分红霉素的方法检出限为0.05mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T 18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T 6379-1986测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(neg ISO 5725:1981)

GB T 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696:1987)

3 原理

试样中残留的红霉素经甲醇溶解后，在碱性条件下用三氯甲烷提取，提取液经浓缩并溶解后，利用杯碟法进行检测，并用红霉素标准曲线进行定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-1992中规定的三级水。

4.1 试剂

4.1.1 甲醇。

4.1.2 正己烷。

4.1.3 三氯甲烷。

4.2 试验菌种

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )。菌种号(China Microbial Culture Collection) CMCC(B)63501。

4.3 标准物质

红霉素。923 IU/mg或相当者。

4.4 工作溶液的配制

4.4.1 氢氧化钠溶液：1 mol/L。称取40.0g氢氧化钠，溶解于水中并定容至1000mL。

4.4.2 磷酸氢二钠溶液：10g/L。称取10.0g磷酸氢二钠，溶解于水中并定容至1000 mL。

4.4.3 磷酸盐缓冲溶液：pH8.0。称取16.73g无水磷酸氢二钾，0.53 g无水磷酸二氢钾，溶解于水中并定容至1 000 mL。

4.4.4 生理盐水：8.5g/L。称取8.5 g氯化钠，溶解于1000 mL水中，121℃高压灭菌20 min。

4.5 标准溶液的配制

4.5.1 红霉素标准储备溶液：准确称取(精确至0.1 mg)适量的红霉素标准物质(4.3)，用甲醇(4.1.1)溶解并定容浓度为1000ug/mL(按效价换算)的标准储备溶液。4 ℃保存，贮存期限一周。

4.5.2 红霉素标准工作溶液：取标准储备溶液(4.5.1)用磷酸盐缓冲溶液(4.4.3)稀释，配制成浓度为0.05、0.10、0.20、0.40和0.80ug/mL的标准工作溶液。当天配制，当天使用。

4.6菌悬液的配制

将试验菌种(4.2)接种于培养基1内，经(35±1)℃培养18h～24h后，再转种于培养基2的斜面上，置(35士1)℃培养7d。镜检芽孢在85％以上后，用10 mL生理盐水(4.4.4)洗下菌苔，于65℃水浴30 min后，离心(3000r/min)20 min，弃去上清液。再加10 mL生理盐水，重复离心步骤两次。最终用10 mL生理盐水制成芽孢菌悬液。4℃保存，贮存期限一个月。

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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