1 范围

本标准规定了蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定。

本标准的方法检出限：甲硝唑检出限为0.1 ug/kg；洛硝哒唑和二甲硝咪唑检出限均为0.2 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

蜂蜜中三种硝基咪唑类药物残留用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后，经过固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

4 试剂和材料

水力GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 乙腈：色谱纯。

4.3 乙酸乙酯：色谱纯。

4.4 甲酸：优级纯。

4.5 无水硫酸钠：分析纯。在650℃马弗炉中灼烧6h，贮存于干燥器中。

4.6 洗脱剂：甲醇＋乙腈+0.1％甲酸水(40+18+42)。

4.7 甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑标准物质：纯度≥98％。

4.8 甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取适量的甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑标准物质，分别用甲醇配成标准储备液。储备液在低于4℃时可保存两个月。

4.9 甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑混合标准工作溶液A和B：根据需要吸取适量甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑标准储备溶液，用甲醇稀释成甲硝唑为1.0ug/mL，洛硝哒唑和二甲硝咪唑均为2.0ug/mL的混合标准工作溶液A。再吸取适量混合标准工作溶液A用甲醇稀释成甲硝唑为0.010ug/mL，洛硝哒唑和二甲硝咪唑均为0.020ug/mL的混合标准工作溶液B。混合标准工作溶液A和B应现用现配。

4.10 甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑混合基质标准工作溶液：根据需要吸取适量甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑混合标准工作溶液A和B，用空白样品提取液稀释成浓度分别为0.25ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、5.00ng/mL的混合基质标准工作溶液。混合基质标准工作溶液应现用现配。

4.11 BAKERBOND Carboxylic Acid固相萃取柱或相当者：500 mg，3 mL。使用前用4 mL乙酸乙酯预处理，保持柱体湿润。

4.12 滤膜：0.20um。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3 液体混匀器。

5.4 固相萃取真空装置。

5.5 振荡器。

5.6 具塞玻璃离心管：50 mL。

5.7 真空泵：真空度应达到80 kPa。

5.8 离心机。

5.9 旋转蒸发器。

5.10 刻度样品管：5 mL。

5.11 梨形瓶：150 mL。

5.12 筒形漏斗。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。

6.2 试样保存

将试样于常温下保存。

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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