1 范围

本标准规定了蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限：蜂王浆中的林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素、交沙霉素均为2.0 ug/kg；蜂王浆冻干粉中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、克林霉素、交沙霉素均为2.0 ug/kg，替米考星、螺旋霉素、吉他霉素均为5.0ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素和交沙霉素的残留用Tris提取液提取，提取液经Oasis HLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定容后，供液相色谱-串联质谱法测定。外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1 水：GB/T 6682，一级。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙酸铵。

4.4 乙腈：色谱纯。

4.5 盐酸。

4.6 三羟甲基氨基甲烷(Tris): C₄H₁₁NO₃。

4.7 氯化钙(CaC1₂·2H₂O)。

4.8 甲醇溶液(2+3)：量取400 mL甲醇(4.2)与600 mL水混合。

4.9 0.01 mol/L乙酸铵溶液：0.77g乙酸铵(4.3)溶解于水中，定容于1000 mL容量瓶中。

4.10 定容液：0.01mol/L乙酸铵溶液(4.9)＋乙腈(4.4)(17+3)。

4.11 Tris提取液：称取12.0 g三羟甲基氨基甲烷(4.6)和7.35g氯化钙(4.7)溶解于水中，用盐酸(4.5)调节pH值为9，定容至1000 mL。

4.12 标准物质：林可霉素(CAS:7179-49-9)、红霉素(CAS:59319-72-1)、替米考星(CAS:108050-54-0)、泰乐菌素(CAS:74610-55-2),螺旋霉素(CAS: 8025-81-8)、克林霉素(CAS:21462-39-5)、吉他霉素(CAS:1392-21-8)和交沙霉素(CAS:16846-24-5)纯度≥95％。

4.13 标准储备溶液Ⅰ：1.0mg/mL。分别准确称取每种标准物质(4.12)适量，分别放入相对应的10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4℃保存。

4.14 标准储备溶液Ⅱ：10.0 ug/mL。分别吸取0.1mL各标准储备溶液(4.13)，分别放入相对应的10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4℃保存。

4.15 标准工作溶液：2.0 ug/mL。分别吸取2.0 mL标准储备溶液(4.14)，分别放入相对应的10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

4.16 Oasis HLB固相萃取柱或相当者；500 mg, 6 mL。使用前，依次用10 mL甲醇和10 mL水活化，在抽真空前的各步骤中，都保持柱体湿润。

4.17 滤膜：0.2 um。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 天平：感量0.01g，0.0001g。

5.3 固相萃取装置。

5.4 氮气浓缩仪。

5.5 具塞聚丙烯离心管：50 mL。

5.6 离心机。

5.7 超声波清洗仪。

5.8 pH计。

5.9 振荡器。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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