(一)原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和纯化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。

(二)仪器与试剂

1．仪器

(1)离子色谱仪：包括电导检测器，配有抑制器，高容量阴离子交换柱,25µL定量环。

(2)食物粉碎机。

(3)分析天平：感量0.1mg和1mg。

(4)超声波清洗器。

(5)离心机：转速不低于10000 r／min，配5mL或10mL离心管。

(6)O.22µm水性滤膜针头滤器。

(7)净化柱：包括C₁₈柱、Ag柱和Na柱或等效柱。

(8)注射器：1.0mL、2.5mL。

2．试剂

(1)超纯水：电阻率为18．2 MQ·cm。

(2)亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]：分析纯。

(3)乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H203]：分析纯。

(4)硼酸钠(Na₂B₄O₇·1OH2O)：分析纯。

(5)亚铁氰化钾溶液(106g／L)：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并定容至l 000mL。

(6)乙酸锌溶液(220g／L)：称取220.0g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶解，后用水并稀释至1000mL。

(7)饱和硼砂溶液(50g／L)：称取5.0g硼砂钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。

(8)亚硝酸根离子(NO2-)标准溶液(100mg／L，水基体)。

(9)硝酸根离子(NO；-)标准溶液(1 000 mg／L，水基体)。

(10)亚硝酸盐(以NO2-计，下同)和硝酸盐(以NO3-计，下同)混合标准使用液：准确移取亚硝酸根离子(NO2-)标准溶液和硝酸根离子(NO3-)标准溶液各1.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升含亚硝酸根离子1.0µg和硝酸根离子10.0 µg。所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol／L氢氧化钠和水分别浸泡4h，然后再用水冲洗3～5次，晾干备用。

(三)操作步骤

1．试样预处理

将新鲜蔬菜、水果用去离子水洗净，晾干后，取可食用部分切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用组织捣碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。

2．提取

称取试样匀浆5.000g，以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每隔5min振摇一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，用水定容至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000r／min离心15min，上清液备用。

取上清液约15ml。通过O．22µm水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面3mL(如果氯离子大于100mg／L，则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和Na柱，弃去前面7mL)，收集后面洗脱液待测。

固相萃取柱使用前需要进行活化，如使用OnGuardⅡRP柱(1.0 mL)、0n—GuardⅡAg柱(1．0 mL)和OnGuardⅡNa柱(1.OmL)，其活化过程为：onGuardⅡRP柱(1.OmL)使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过，静置活化30min，onGuardⅡAg柱(1.0mL)和onGuardⅡNa柱(1．0 ml)用10mL水通过，静置活化30min。

3．色谱参考条件

(1)色谱柱 氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱或性能相当的离子交换柱。

(2)淋洗液 氢氧化钾溶液，浓度为6～70mmol。洗脱梯度为6mmol 30min，70mmol 5min，6mmol 5min。

(3)抑制器 连续自动再生膜阴离子抑制器，或等效抑制装置。

(4)检测器 电导检测器，检测池温度35℃。

(5)淋洗液流速 1.OmL／min。

(6)进样体积25µL(可根据样品中被测离子含量进行调整)。

4．测定

(1)标准曲线 吸取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成系列标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为O.00 mg／L、0.02 mg／L、O．04 mg／L、O．06 mg／
L、O．08 mg／L、0．10 mg／L、0．15 mg／L、O．20 mg／L，硝酸根离子浓度为0．OO mg／L、O．2 mg／L、O．4 mg／L、O．6 mg／L、0．8 mg／L、1．O mg／L、1．5 mg／L、2．0 mg／L的混合标准溶液，从低到高浓度依次进样，得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以亚硝酸根离子和硝酸根离子的浓度(mg／L)为横坐标，以峰高或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归方程。

(2)样品测定 用1．0 mL注射器分别吸取空白和试样溶液，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据保留时间定性，分别测量空白和样品的峰高或峰面积。

(四)计算结果

试样中亚硝酸盐(以NO2-计)或硝酸盐(以N03-计)含量按下式计算：

X=(C-C0)*V*f*1000/m*1000

式中：X——样品中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量,mg／kg；

c——测定用样液中亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度,mg／L；

C_O——一试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度,mg，／L；

f——试样溶液稀释倍数；

m——样品的质量，g；

V——测定用样液体积，mL。

计算结果保留三位有效数字。

(五)精密度

在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的lO%。