4 测定方法

4.1 方法提要

本方法采用小鼠单位定量测定NSP毒素的总量，采用brevetoxin-2作为毒素的标准品。根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，计算确定每克贝肉内NSP的小鼠单位。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的NSP。

4.2 试剂和材料

4.2.1 丙酮(分析纯)。

4.2.2 二氯甲烷(分析纯)。

4.2.3 1％吐温-60生理盐水。

4.2.4 无水硫酸钠。

4.2.5 小白鼠：体重为20g±1g ICR品系，雄性。

4.2.6 标准品：短裸甲藻毒素(brevetoxin-2)。

4.3 设备和器皿

4.3.1 旋转蒸发器。

4.3.2 真空泵。

4.3.3 均质器。

4.3.4 化学通风柜。

4.3.5 天平：感量为0.1g。

4.3.6 冰箱：0℃～5℃和-15℃～-20℃。

4.3.7 500 mL梨形瓶或圆底烧瓶。

4.3.8 烧杯500 mL和200 mL。

4.3.9 布氏漏斗。

4.3.10 500 mL抽滤瓶。

4.3.11 500 mL分液漏斗。

4.3.12 玻璃珠。

4.3.13 注射器：2 mL或5 mL无菌注射器。

4.4 测定步骤

4.4.1 提取

取样品100 g用300 mL丙酮均质1 min。用布氏漏斗减压抽滤并收集提取液。残留物再用样品等体积(100 mL)丙酮冲洗抽滤两次，合并丙酮抽滤液。将抽滤液转移至旋转蒸发瓶中，56℃旋转蒸发除去丙酮。将剩余水相提取物用二氯甲烷冲洗转移到500 mL的分液漏斗中，轻轻摇动，静置分层。二氯甲烷层(下层)经无水硫酸钠过滤，滤完用二氯甲烷继续漂洗至无水硫酸钠无色。收集洗脱液移入300 mL旋转蒸发瓶中，40℃旋转蒸发后的存留部分即为样品脂质提取物。用1％吐温-60生理盐水将样品脂质提取物定容至10 mL，添加玻璃珠振荡使其悬浮混匀，所形成的悬液即为提取液。

4.4.2 小鼠试验

将小鼠称量并记录质量。每个样品注射3只小鼠。对每只试验小鼠腹腔注射1 mL提取液，同时另取一只小鼠注射1 mL 1％吐温-60生理盐水作为试剂空白对照。注射时若有1滴以上提取液溢出，就须将该只小鼠丢弃，并重新注射1只小鼠。记录注射完毕时间，仔细观察小鼠停止呼吸时所表明的死亡时间(到小鼠呼出最后一口气止)，记录死亡时间。若小鼠的中位数死亡时间小于8 min，则要用1％吐温-60生理盐水对提取液进行稀释，再注射另一组3只小鼠，以得到大于8 min的死亡时间。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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