3.4测定步骤

3.4.1提取

称取试样约20g(精确至0.1g)于250 mL烧瓶中，加入10 mL水和500 mg胰蛋白酶，摇匀。用碳酸钠溶液(10％)调节溶液PH为8.0～8.5。在40℃水浴中培养3h。冷却至室温。加10mL碳酸钠溶液(10％)，混匀，加100 mL乙酸乙酯和3g助滤剂，高速均质3 min。在布氏漏斗上敷上2g助滤剂，抽滤均质后的样液。在残渣中再加100 mL乙酸乙酯，高速均质3 min，抽滤再次均质后的样液，合并滤液于250 mL分液漏斗中。加50 mL 氯化钠饱和的5％碳酸钠溶液至此分液漏斗中，轻摇1 min,静置分层，弃去水层。

3.4.2 净化

在上述乙酸乙酯提取液中，用2 ×50 mL乙酸铵缓冲溶液(I)，每次振摇1 min，静置分层。合并乙酸铵提取液于150 mL分液漏斗中，加10 mL乙酸乙酯，轻摇1 min。将乙酸铵缓冲溶液层转入250 mL圆底烧瓶中，于70℃水浴中旋转蒸发至无乙酸乙酯味。将乙酸铵提取液转入100 mL容量瓶中，用乙酸铵缓冲溶液(I)定容至100 mL。移取50 mL溶液并使通过预先洗涤好的Sep-Pak C18小柱，弃去流出液。用3 mL水淋洗小柱，并弃去淋洗液。用10 mL甲醇进行洗脱，洗脱液收集于10 mL K-D浓缩瓶中。在平缓氮气流下将洗脱液浓缩至干。用0.50 mL流动相溶解，振匀后，溶液供HPLC测定。

3.4.3 测定

3.4.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：ODS C₁₈色谱柱，20 cm×4.6mm(内径)，5 um(粒径)，或相当者；

b)流动相：乙酸铵缓冲溶液(I)-乙腈(65+35);

c)流速：1.2 mL/min；

d)检测波长：243 nm:

e)灵敏度：100 mAU；

f)色谱柱温度：室温；

g)进样量：20 uL。

3.4.3.2 液相色谱测定

根据样液中溴氯常山酮含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中溴氯常山酮响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，在上述液相色谱条件下，溴氯常山酮保留时间约为6.5 min。

3.4.4 确证

3.4.4 门高效液相色谱-质谱条件

a)色谱柱：ODS C₁₈色谱柱，20 cm × 2.1 mm(内径)，5 um(粒径)，或相当者；

b)流动相：乙酸铵缓冲溶液(I)-乙腈(65+35);

c)流速：0.3mL/min;

d)色谱柱温度：室温;

e)进样量：25 uL;

f)扫描方式：全扫描，范围400～450 amu(ESI)；或选择离子监测(PBI);

g)离子化方式：EI(PBI);

h)离子化电压：70 eV;

i)电子倍增器电压：自动调谐值加200 V。

3.4.4.2 高效液相色谱-质谱确证

若试样中溴氯常山酮含量超出限量规定，必要时则对样液按上述液相色谱-质谱条件进行液相色潜-质谱确证分析。

3.4.5 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中溴氯常山酮残留量：

式中：X—试样中溴氯常山酮残留量，mg/kg;

h—样液中溴氯常山酮色谱峰高，mm；

h_s—标准工作液中溴氯常山酮色谱峰高，mm；

c—标准工作液中溴氯常山酮浓度，ug/mL ;

V—样液最终定容体积，mL ;

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.05mg/kg。

4.2 回收率

鸡肉中溴氯常山酮添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.05 mg/kg时，回收率为87.6％;

在0.10 mg/kg时，回收率为92.6％;

在0.50 mg/kg时，回收率为95.8％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。