1 范围

本标准规定了出口肉及肉制品中新霉素残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法

本标准适用于出口猪肉中新霉素残留量的检验。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过2500件为一检验批。

同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

按2.2规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始样品总量不得少于2 kg，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。

如每件中无小包装或有小包装但每袋重量超过2 kg者，则可用锋利刀(经灭菌)在抽出的包件中，每件割取不少于100 g,混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2 kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

2.4 试样制备

将所取样品全部放入高速捣碎机中捣碎均匀，混匀后用四分法缩分出不少于1 kg，均分成两份，作为试样，装入清洁容器内，加封后标明标记。

2.5 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。

注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

用磷酸盐缓冲液-乙腈提取试样中的新霉素，提取液经加热、冷却和过滤以除去蛋白质和脂肪。在阳离子交换柱上与邻苯二甲醛进行衍生化，用四硼酸钾缓冲液-甲醇洗脱，洗脱液用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。

3.2 试剂和材料

除特殊规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

3.2.1 乙腈。

3.2.2 甲醇：紫外光谱纯。

3.2.3 三乙胺。

3.2.4 磷酸(85％)。

3.2.5 氯化钠。

3.2.6 磷酸盐缓冲液：将33.46g磷酸氢二钾和1.046g磷酸二氢钾溶解在水中，并定容至1 L。

3.2.7 混合提取液：磷酸盐缓冲液-乙腈(1+1)。

3.2.8 硼酸钾缓冲液：将2.5g硼酸溶于80 mL水中，用50％(m/V)氢氧化钾溶液调pH至10.5，用定容至100 mL。

3.2.9 邻苯二甲醛试剂：将100 mg邻苯二甲醛溶于1 mL甲醇中，加入200 uL 2-巯基乙醇和10 mL硼酸钾缓冲液，用棕色瓶(有盖)贮存于冰箱中，一周内有效。

3.2.10 碱性缓冲液：将76g四硼酸钾溶于400 mL水中，用50％(m/V)氢氧化钾溶液调pH至11.0,用水定容至500 mL。

3.2.11 洗脱剂：碱性缓冲液-甲醇(1+4)。

3.2.12 阳离子交换树脂：D152。

3.2.13 硫酸新霉素标准品：生化试剂，已知纯度，700 IU/mg以上(硫酸新霉素1 mg =1 000 IU)。

3.2.14 硫酸新霉素标准溶液：称取适量的硫酸新霉素标准品(精确至0.1mg)，用水配成浓度为0.100mg/mL的标准储备溶液，根据需要再用水配成适当浓度的标准工作溶液。

3.2.15 新霉素衍生物标准溶液：将适量的标准工作溶液注入到阳离子交换柱(3.3.6)中，按3.4.2步骤进行衍生化反应，制成新霉素衍生物标准溶液。

3.3 仪器和设备

3.3.1 液相色谱仪：配有荧光检测器。

3.3.2 高速捣碎机。

3.3.3 振荡器。

3.3.4 离心机。

3.3.5 过滤漏斗：滤孔为80～120um、40～80um。

3.3.6 阳离子交换柱：120 mm×5 mm(内径)玻璃柱。用碱性缓冲液(3.2.10)将阳离子交换树脂制成悬浮液，平衡2h，装入玻璃柱中，高度约为6 cm，用5 mL洗脱剂淋洗，流速为0.8 mL/min，然后用水洗至流出液呈中性，备用。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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