3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取试样约10g(准确至0.1g)于一100 mL锥形瓶中，加入60 mL混合提取液(3.2.7)和2g氯化钠，振荡30 min，经滤孔为80～120 um的过滤漏斗抽滤，残渣用3×10 mL混合提取液洗涤。合并滤液和洗液于一250 mL烧杯中。在沸水中加热30 min，取下，于3000r/min离心20 min，置4℃冰箱中冷却20 min，然后经滤孔为40～80um的过滤漏斗抽滤，收集滤液。

3.4.2 衍生化

将滤液注入阳离子交换柱(3.3.6)中，用10 mL水洗柱，弃去流出液。将1 mL邻苯二甲醛试剂注入柱中，反应5 min。然后加2 mL洗脱剂洗脱柱上衍生物。弃去前面1 mL洗脱液，收集后面1 mL洗脱液，立即放置在-18℃冰箱中，15 min后进行液相色谱测定。

3.4.3 测定

3.4.3.1 色谱条件

a)色谱柱：ODS Hypersil, 3 um, 60 mm × 4.6 mm(内径)，或相当者；

b)柱温：35℃；

c)流动相：77.5％甲醇水溶液中含0.09mol/L三乙胺和0.45mol/L磷酸；

d)流速：1.0mL/min；

e)激发波长：345 nm；发射波长：445 nm；

f)进样量：10 uL。

3.4.3.2 色谱测定

根据样液中新霉素含量情况，选定峰面积相近的新霉素衍生物标准溶液。标准液和样液中新霉素衍生物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，新霉素衍生物的保留时间约为6 min。

3.4.4 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

3.4.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)进行计算：

式中：X—试样中新霉素含量，mg/kg；

A—样液中新霉素衍生物的峰面积，mm²；

A_s—新霉素衍生物标准溶液中新霉素衍生物峰面积，mm²；

c—新霉素衍生物标准溶液中相当的硫酸新霉素浓度，ug/mL；

V—最终样液的体积，mL；

m—最终样液相当的试样量，g；

0.855—由硫酸新霉素换算成新霉素的换算系数。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限和回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.05 mg/kg。

4.2 回收率

猪肉中新霉素添加浓度及其回收率实验数据：

在0.05 mg/kg时，回收率为90.4％；

在0.10 mg/kg时，回收率为91.6％;

在0.50 mg/kg时，回收率为96.3％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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