3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取约20 g(精确至0.1g)试样干均质杯中，加入30 mL丙酮-水(1+1)，于均质器上均质2 min,全部转移至50 mL离心管中，用15 mL异辛烷洗涤均质杯和刀片，合并入离心管中。摇匀1 min，于3000r/min离心10 min，移上层异辛烷至心形瓶中。再用15 mL异辛烷洗涤均质杯和刀片，并用此洗涤液再次进行上述提取，离心后，合并异辛烷层于心形瓶中。于80℃水浴中用旋转蒸发器浓缩至很小体积。

3.4.2 净化

于上述浓缩液中加入9 mL正己烷和12 mL乙腈，于超声波浴中超声振摇5 min，充分提取。转移至50 mL离心管中，于3 000r/min离心5 min。移下层乙腈层于心形瓶中。再用12 mL乙腈提取一次，离心5 min，合并乙腈层。加入20 mL水，于60℃水浴中用旋转蒸发器浓缩至约6 mL，加入6 mL水。

取上述溶液缓慢注入经预处理过的C18 Sep-Pak小柱中，弃去流出液，用氮气流吹干Sep-Pak柱。用3×5 mL乙腈洗脱，收集洗脱液于具磨口的刻度离心管中。于60℃水浴中用旋转蒸发器蒸干，用甲醇-乙腈-水溶液(9+9+2)溶解并定容至1.0 mL,溶液供液相色谱测定。

3.4.3 测定

3.4.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：ODS-C₁₈ 色谱柱，15 cm×4.6 mm(内径)，粒度5 um ;

b)流动相：甲醇-乙腈-水溶液(9+9+2) ;

c)流速：双泵流速各为0.5 mL/min，总流速1.0mL/min;

d)色谱柱温度：30℃；

e)检测器：二极管阵列检测器或可变紫外检测器，245 nm;

f)进样量：20 uL。

3.4.3.2 液相色谱测定

根据样液中伊维菌素含量情况，选定峰高相近的标准工作液。标准工作液和样液中伊维菌素响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，伊维菌素保留时间约为8 min。

3.4.4 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算与表述

用色谱数据处理机，或按式(1)计算试样中伊维菌素残留量：

式中：X—试样中伊维菌素残留量，mg/ kg ;

h—样液中伊维菌素峰高，mm；

h_s—标准工作液中伊维菌素峰高，mm；

c—标准工作液中伊维菌素浓度，ug/mL；

V—样液最终定容体积，mL；

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.015 mg/kg。

4.2 回收率

牛肉中伊维菌素添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.015 mg/kg时，回收率为82.3％；

在0.050 mg/kg时，回收率为85.7％;

在0.100 mg/kg时，回收率为83.6％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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