1 范围

本标准规定了出口肉及肉制品中雌二醇残留量检验的抽样、制样和放射免疫测定方法。

本标准适用于出口冻牛肉中雌二醇残留量的检验。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过2 500件为一检验批。

同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件中至少取一袋作为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋小包装重量超过2 kg，则可用灭菌刀具从每件中割取不少于100g，混合后置于清洁容器内，作为混合原始样品。混合原始样的总量不少于2 kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

2.4 试样制备

从混合原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入绞碎机中绞碎，充分混匀，用四分法缩分至不少于500 g，均分成两份。装入清洁容器内作为试样，加封并标明标记。

2.5 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

试样中残留的雌二醇，用二氯甲烷提取。提取液经蒸干，残渣用甲醇水溶液浸出。浸出液经C₁₈柱净化后，加入雌二醇抗体及标记的雌二醇溶液，置4℃静置后加分离剂，离心，取上清液，用液体闪烁分析仪进行测定。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

3.2.1 磷酸氢二钠溶液：取35.81 g磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)，溶解于水中并稀释至500 mL。

3.2.2 磷酸二氢钠溶液：取5.52 g磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)，溶解于水中并稀释至200 mL。

3.2.3 磷酸盐缓冲溶液：取400 mL磷酸氢二钠溶液、100 mL磷酸二氢钠溶液及9g氯化钠，充分溶解并加水至1000 mL(pH7.1±0.1),

3.2.4 磷酸盐-明胶缓冲液：取0.1 g明胶置于100 mL磷酸盐缓冲溶液中，加热溶解。

3.2.5 活性炭：60目。

3.2.6 葡聚糖：G200。

3.2.7 分离剂(活性炭-葡聚糖溶液)：取100 mg葡聚糖，溶解于100 mL磷酸盐-明胶缓冲液中，然后加1g活性炭，电磁搅拌1h，置于锥形瓶中于4℃保存，临测定前用磷酸盐-明胶缓冲液稀释4倍。

3.2.8 甲醇水溶液：20％(V/V)。

3.2.9 甲醇-磷酸盐-明胶缓冲液：甲醇水溶液+磷酸盐-明胶缓冲液(1+4)。

3.2.10 冰乙酸-乙醇溶液：冰乙酸-无水乙醇(1+80)。

3.2.11 氢氧化钠溶液：0.1mal/L。

3.2.12 二氯甲烷：重蒸馏。

3.2.13 2,5-二苯基噁唑。

3.2.14 1,4-双〔2'-(4'-甲基-5'-苯基噁唑)〕-苯。

3.2.15 闪烁液：取4 g 2,5-二苯基噁唑和0.2 g 1,4-双〔2'-(4'-甲基-5'-苯基噁唑)〕-苯，溶于1000mL二甲苯中，充分混匀，置于棕色瓶内。静置三日后即可使用。

3.2.16 雌二醇-6-羧甲基-BSA抗血清(E2-Ab)：上海市内分泌研究所制品或相当者，4℃保存。

3.2.17 雌二醇标准品：纯度≥99％(USA Sigma公司提供或相当者。)

3.2.18 雌二醇标准储备液：取适量雌二醇标准品，用无水甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准储备液，密封，置4℃保存。

3.2.19 雌二醇标准工作液：取一定量的雌二醇标准储备液，用甲醇-磷酸盐-明胶缓冲液(3.2.9)稀释成10,20,50,100,200,400 pg/100 uL的标准工作液。

3.2.20 雌二醇氛标记物(³H-E₂=38Ci/mmol)：英国放化中心Amersham生产，或相当者。取一定的原液吹至近干，加入磷酸盐缓冲溶液(3.2.3)配成7000 cpm/100uL工作液，置4℃保存(有效期内使用)。

3.2.21 净化柱：Sep-pak C₁₈小柱。

3.2.22 氮气。

相关链接：出口肉及肉制品中伊维菌素残留量检验方法（二）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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