3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取约5g样品(精确到0.1g)于150 mL角瓶中，加10.0 mL 3 mol/L氢氧化钠溶液，松松加塞，将其置于100℃水浴中，加热30 min，浴中水浴面应高于组织试样。

将碱性水解产物于冰浴中冷却，用4 mL浓盐酸酸化至pH≤1(至酸碱试纸呈深红色)。于酸化的水解产物中加30 mL乙酸乙酯，加塞，振摇提取30 s，静置分层，将上层液体滤入一125 mL分液漏斗中。待分层后，将下层水相放回样品瓶中，再加20 mL乙酸乙酯，加塞，振摇提取30 s，静置分层，将上层液体并入分液漏斗中。静置分层，弃去水相。

于乙酸乙酯提取液中加5 mL 0.5 mol/L柠檬酸缓冲液(pH6.0)，振摇，放置使下层清晰(10 min)。将水相收集于25 mL具塞离心管中。另用5 mL pH6.0的缓冲液再提取乙酸乙酯相一次。使水相清晰，合并水提取液于同一离心管中，加2 mL浓盐酸，混匀，供下述柱层析分离用。

将酸化的水提取液移入离子排斥柱中：放出提取液使液面至树脂床顶部。用20 mL 1 mol/L盐酸淋洗离心管和树脂，经柱放出。另用20 mL 1 mol L盐酸再淋洗柱子，弃去流出液。用75 mL甲醇-水(10+90)洗脱，此时可将柱子放净，收集洗脱液并转入一125 mL分液漏斗中。流出液的流速约为1.2 mL/min。

洗脱液中加1.0mL浓盐酸，用3×50 mL乙酸乙酯提取收集乙酸乙酯提取液于250 mL圆底烧瓶中，于50℃水浴旋转蒸发器中蒸发至干：

3.4.2 酯化

用3 mL甲醇将残渣洗入10 mL离心管中，在60℃水浴氮气流下吹干：加0.2mL新鲜配制的甲醇-硫酸(97+3)，加塞，于55℃～60℃水浴中保温30 min：取出，加1.0mL正已烷涡旋混匀30s，离心(2000r/min) 5 min，取0.1 mL正己烷溶液稀释到1.0 mL。供气相色谱测定。

3.4.3 标准物酯化

吸取1.0mL喹喔啉-2-羧酸标准工作液置于10 mL离心管中，在60℃水浴氮气流下吹干。加0.2mL新鲜配制的甲醇-硫酸(97+3)，加塞，于55℃～60℃水浴中保温30 min。提取和稀释(1：10)的操作均按3.4.2步骤进行。酯化标准与酯化样品应同时进行。

3.4.4 测定

3.4.4.1 色谱条件

a)色谱柱：HP-5,15 m×0.53 mm (id)×1.5 um熔融石英毛细管柱或相当的色谱柱；

b)柱温：170℃

c)进样口温度：250℃;

d)检测器温度：280℃；

e)载气、尾吹气：氮气(纯度≥99.999％)；载气流速：6mL/min；尾吹气流速：40 mL/min；

f)进样方式：填充柱进样口进样；

g)进样量：2 uL。

3.4.4.2 色谱测定

根据样液中喹喔啉-2-羧酸含量的情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中喹喔啉-2-羧酸甲酯的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下喹喔啉-2-羧酸甲酯的保留时间约为4 min。

3.4.5 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

3.4.6 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中卡巴氧代谢物(喹喔啉-2-羧酸)的残留含量：

式中：X—试样中卡巴氧代谢物(喹喔啉-2-羧酸)的残留含量，mg/kg；

A—样液中喹喔啉-2-羧酸甲酯的峰面积，mm2；

A_s—标准工作液中喹喔啉-2-羧酸甲酯的峰面积，mm2；

c—标准工作液中喹喔啉-2-羧酸的浓度，ug/mL ;

V—样液最终定容体积，mL ;

m—最终样液所代表的试样质量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限和回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.03mg/kg。

4.2 回收率

猪肉中喹喔啉-2-羧酸添加浓度及其回收率的试验数据：

在0.03 mg/kg添加水平时，回收率为98.3％;

在0.10 mg/kg添加水平时，回收率为93.6％;

在0.30 mg/kg添加水平时，回收率为93.4％。

相关链接：出口肉及肉制品中卡巴氧残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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