3.4 测定步骤

3.4.1 提取及净化

称取5 g试样(精确至0.01g) ,置于洁净的50 mL具塞离心管中，加入10 uL乙酸钠缓冲溶液(3.2.13)和25 uL葡萄糖苷酸酶，旋涡混匀，于37℃中保温8 h～14h。

水解结束后，加入10 mL 无水乙醚。加盖并旋涡混匀3 min，于3500r/min离心功min后，将上层醚相转移至15 mL锥形离心管中,于40℃水浴中，氮气流下吹至近干。重复上述操作一次。用1 mL三氯甲烷溶解残渣，加入2 × 2.5 mL氢氧化钠溶液(3.2.12)，旋涡混匀、抽提，于3500 r/min离心5 min,各上层氢氧化钠溶液转移至10 mL，锥形离心管中。在合并的氢氧化钠溶液中加入0.5 mL磷酸溶液(3.2.11)，旋涡混匀。将溶液注入C₁₈固相萃取柱中(C18固相萃取柱预先用3 mL甲醇和3 mL乙酸钠缓冲溶液淋洗)，依次用2 mL乙酸钠缓冲溶液(3.2.13)和2 mL 甲醇-水溶液(3.2.10)淋洗，弃去流出液。再用2 mL甲醇进行洗脱，并收集于5 mL锥形离心管中(保持抽气2 min，使柱中的液体逐渐干涸)。将洗脱液置于55℃水浴中氮气流下吹干。用200 uL乙腈溶解残渣，供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3.4.2 测定

3.4.2.1 高效液相色谱条件

a)色谱柱：Zorbax Extend-C₁₈ (150 mm × 2.1 mm,粒径5 um)，或相当者；

b)流动相：乙腈-水溶液(40+60)含0.025％乙酸；

c)流速：0.2 mL/min；

d)柱温：22℃；

e)进样量：10 uL。

3.4.2.2 质谱条件

a)离子化模式：负离子电喷雾(ESI^-)

b)锥电压：50 V；

c)毛细电压：3 kV；

d)碰撞电压：20 V；

e)分析器压力：小于3 mPa(3×10^-5 mbar);

f)碰撞气：氢气；

g)锥气流速：80 L/h；

h)喷雾气流速：480 L/h；

i)选择反应检测模式：m/z 321→P303，m/z 321→277。其中m/z 321→277用于定量测定。

3.4.2.3 高效液相色谱-质谱/质谱测定

按浓度由小到大的顺序，依次分析基质标准工作溶液(3.2.16)，得到浓度与峰面积的工作曲线。样品溶液中玉米赤霉醇的响应值应在工作曲线范围内。

3.4.3 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

3.4.4 结果计算和表述

试样中玉米赤霉醇残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：

式中：

X—试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(ug/kg) ;

c—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V—试样溶液定容体系，单位为毫升(mL)；

m—试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

注：计算结果应扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为1 ug/kg。

4.2回收率

玉米赤霉醇添加浓度及其回收率数据：

— 1 ug/kg时，回收率72％;

— 5 ug/kg时，回收率74％;

— 50 ug/kg时，回收率80％。

相关链接：进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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