3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取5g(准确至0.01g)样品于50 mL离心管中，加入20 mL、乙酸乙酯，均质1 min后，超声提取5 min，再以3000r/min的速度离心10 min，取上清液转移至鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上清液于同一鸡心瓶中。

3.4.2 净化

将提取液于40℃下旋转蒸发至近干(不能全部蒸干)，用5 mL乙酸-乙酸乙酯(5+95)溶解，将溶液转移到预洗过的SCX柱上的贮液器中，再用5 mL乙酸-乙酸乙酯(5+95)洗鸡心瓶，洗液一并转移到SCX柱上的贮液器中，打开活塞，以2mL/min流速滴下。依次用2.5 mL丙酮，5 mL甲醇，5 mL乙腈在2 mL/min流速下淋洗柱子，用5 mL氨水-乙腈(5+95)洗脱。弃去前2 mL洗脱液，收集后面的洗脱液于玻璃管中，在40℃水浴上用氮气小心吹干，用水定容至1 mL,漩涡振荡或超声溶解，过0.45 um滤液膜后，进行HPLC分析。

3.4.3 测定

3.4.3.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：C₁₈柱，250 mm ×4.6 mm(内径)，填料颗粒直径5 um或相当者。

b)流动相：A：水，B：乙腈，C：甲醇。洗脱程序见表1。

表1 方法的洗脱梯度程序

c)动相流速：1.0 mL/min。

d)紫外检测器波长：320 nm。

e)色谱柱温度：35℃。

f)进样量：50 uL。

3.4.3.2 色谱测定

根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和待测样液中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。

表2 各被测物的保留时间

3.4.4 空白实验

除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。

3.4.5 结果计算和表述

用色谱数据处理软件中的外标法，或按式(1)计算试样中被测物的残留量：

式中：

X—试样中被测物的残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

A—样液被测物的色谱峰面积，单位为平方毫米(mm²);

A₀—空白实验被测物的色谱峰面积，单位为平方毫米(mm²) ;

A_s—标准工作液被测物的色谱峰面积，单位为平方毫米(mm²);

c—标准工作液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终样液代表的试样量，单位为克(g)。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为：1 ug/kg。

4.2 回收率

鸡肉在添加水平为1 ug/kg、2 ug/kg、5 ug/kg时，DMZOH的回收率在72.7％～83.86％之间；罗硝唑的回收率在65.7％～86.35％之间；甲硝唑的回收率在69.85％～87.14％之间；塞克硝唑的回收率在72.7％～83.86％之间；二甲硝咪唑的回收率在75.75％～91.46％之间；替硝唑的回收率在81.00％～90.10％之间；奥硝唑的回收率在92.73％～117.40％之间。

猪肉在添加水平为1 ug/kg、2ug/kg、5 ug/kg时，DMZOH的回收率在81.10％～93.50％之间；罗硝唑的回收率在62.2％～82.40％之间；甲硝唑的回收率在76.68％～88.60％之间；塞克硝唑的回收率在76.80％～88.60％之间；二甲硝咪唑的回收率在73.40％～97.20％之间；替硝唑的回收率在93.50％～99.50％之间；奥硝唑的回收率在79.50％～94.00％之间。

相关链接：进出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、罗硝唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑残留量测定方法 （一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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