1 范围

本标准规定了动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量液相色谱-质谱联用测定方法。

本标准适用于虾、鸡肉、蜂蜜、肠衣中硝基呋喃类代谢物残留量的测定。

2 测定方法

2.1 方法提要

样品中与蛋白质结合的硝基呋喃类代谢物在酸性环境下水解游离出来，用邻硝基苯甲醛衍生后，以乙酸乙酯提取。经过净化浓缩，用液相色谱质谱联用仪测定。外标法定量。

2.2 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。

2.2.1 乙腈：HPLC级。

2.2.2 甲醇：HPLC级。

2.2.3 乙酸乙酯：HPLC级。

2.2.4 邻硝基苯甲醛。

2.2.5 二甲亚砜。

2.2.6 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用。

2.2.7 盐酸溶液：0.125 mol/L。

2.2.8 氢氧化钠溶液：1 mol/L。

2.2.9 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L。

2.2.10 氯化钠溶液：300g/L。

2.2.11 盐酸溶液：1 mol/L。

2.2.12 衍生化试剂：称取100 mg邻硝基苯甲醛溶于12.5 mL二甲亚砜中，现用现配。

2.2.13 定容液：0.1％乙酸水溶液，乙腈，甲醇3.3.2(体积分数)。

2.2.14 硝基呋喃类代谢物标准品：AOZ、AMOZ、AHD·HCI、SEM·HCI，纯度≥99.0%。

2.2.15 标准储备液：分别称取硝基呋喃类代谢物标准品AOZ、AMOZ 10.0 mg, AHD·HCI 13.2 mg，SEM·HCI 14.9 mg(准确至0.1mg)，分别用甲醇溶解井转移至20 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该溶液浓度为0.5 mg/mL, 4℃以下保存。

2.2.16 标准中间液：分别吸取四种硝基呋喃类代谢物的标准储备液各1.0mL，用甲醇定容至50 mL，浓度为10 ug/mL。

2.2.17 标准工作液：取标准中间液1. 0 mL，甲醇稀释定容至100 mL，浓度为0.1ug/mL。

2.2.18 校正曲线标准工作液：将标准工作液稀释至适宜浓度制作校正曲线，临用时配制。

2.3 仪器和设备

2.3.1 液相色谱质谱联用仪，可进行二级质谱分析。

2.3.2 电子天平。

2.3.3 超声波清洗器。

2.3.4 恒温水浴振荡器。

2.3.5 pH计。

2.3.6 自动平衡离心机(最大转速5 000r/min)。

2.3.7 旋转蒸发器。

2.3.8 氮吹仪。

2.3.9 均质器。

2.3.10 漩涡混合器。

2.4 测定步骤

2.4.1 样品处理

蜂蜜样品混匀后可直接称取。

肉类和虾类先用绞肉机绞碎，混匀。

盐渍肠衣样品先用剪刀剪成小于5 mm宽的段，用清水洗去盐分，再用蒸馏水冲洗，在丝网器皿上摊开沥去水分5 min。

2.4.2 水解、衍生和提取

称取1g(精确至0.01g)混匀后的样品于50 mL磨口具塞离心管中，加入30 mL 0.125 mol/L盐酸溶液(2.2.7)和1.0 mL衍生试剂(2.2.12) ,肉类和虾样品均质1 min，蜂蜜和肠衣样品盖好塞子用力摇匀，松开塞子放气。盖好塞子后置于恒温水域振荡器上37℃振荡水解16小时(过夜)。

2.4.3 净化

向水解溶液中加入约4.0 mL 1 mol/L氢氧化钠溶液(2.2.8)，用1 mol/L盐酸溶液(2.2.11)和0.1 mol/L氢氧化钠溶液(2.2.9)，调节pH值至7.0～7.5。3000 r/min离心10 min，上清液倾入250 mL分液漏斗中。残渣用5 mL水洗涤，用玻璃棒搅匀，3000r/min离心10 min，上清液并入分液漏斗中。

向分液漏斗中加入40 mL乙酸乙酯，振摇1 min，静置3 min以上。分层后将下层水相转移至另一分液漏斗中，用40 mL乙酸乙酯再提取一次，弃去水相。用10 mL 300g/L氯化钠溶液(2.2.10)依次洗涤两分液漏斗中的乙酸乙酚溶液，弃去水相。将乙酸乙酯层，通过装有2 g无水硫酸钠的漏斗过滤至鸡心瓶中。50℃旋转蒸发至3 mL～5mL，转移至12 mL试管中，用5 mL乙酸乙酯分3次洗涤鸡心瓶，合并洗涤液于试管中，然后在50℃氮气流下吹干。用定容液(2.2.13)定容至1.0mL，通过0.45um滤膜过滤至样品瓶中，供液相色谱质谱测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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