3.4 测定步骤

3.4.1 控制液的配制

3.4.1.1 阴性控制液的配制：取2 mL组织阴性对照溶液(3.2.2.1)，加入到6 mL MSU提取缓冲溶液(3.2.2.3)中制成阴性基准液，在室温下混合均匀，该基准液可在室温下放置不超过6h。用于分析仪和试剂的性能监测。

3.4.1.2 阳性控制液的配制：取0.3mL抗生素标准溶液(3.2.2.2)，加6 mL组织阴性对照溶液(3.2.2.1)，混匀后从中取2 mL溶液加入到6 mL MSU提取缓冲溶液(3.2.2.3)中制成阳性基准液，在室温下混合均匀，该基准液可在室温下放置不超过6h。用于分析仪性能监测和阳性确认。

3.4.2 提取

称取试样约10g(精确到0.1g)于50 mL离心管中，加入30 mL MSU提取缓冲液(3.2.2.3)。于高速组织捣碎匀质器中匀质30s～60s。然后将离心管放置在80℃±2℃的电热恒温器中，保温30 min后，将管取出放置在冰水浴中冷却10 min；于3300 r/min下离心10 min，倒出上清液，注意除去浮在表层的脂肪粒。用M2缓冲液(3.2.2.3)或0.1mol/L盐酸调节提取液pH，每次加入300 uL M2缓冲液或0.1 mol/L盐酸直至pH达到7.5左右。必要时取适量上清液用等体积正己烷进行脱脂。提取液恢复到室温后立即进行受体分析。

3.4.3 测定

3.4.3.1 将一磺胺受体试剂(3.2.2.4)加入到硅硼酸盐玻璃试管中，用微量移液器加入300 uL水，置于旋涡振荡器上混匀10 s将试剂溶解。

3.4.3.2 加入 4 mL 样品提取液(3.4.2)或阴性控制液(3.4.1.1)或阳性控制液(3.4.1.2)分别用于测试样本、阴性对照和阳性对照。

3.4.3.3 将一磺胺氘标记物试剂(3.2.2.5)加入试管，混合15 s，65℃±1℃温育3 min。

3.4.3.4 取出试管，3300r/min离心3 min，立即倾去上清液，用吸水纸和棉签擦拭去试管口处的水渍和壁上其他残留物。

3.4.3.5 加300 uL水，用旋涡振荡器混合10 s将试管中的沉淀物重新溶解，加3 mL闪烁液(3.2.4)至试管中，加盖、混匀，在[³H]频道进行60 s LSC记数cpm。

4 结果判定

4.1 控制点的确定

根据样本组织类型确定相应的控制点，对于同一批号的试剂(3.2.2)，正常情况下只需测定1次控制点。筛选水平为50 ug/kg时，控制点设定如下：

取空白组织样品，称样10 g，加入0.5 mL抗生素标准溶液(3.2.2.2)，按3.4.2前处理和3.4.3测试，取6个加标样本平行测试的cpm读数平均值，乘以系数1.3作为筛选测定的控制点。

4.2 结果判定

当样品cpm值大于控制点，判定为“阴性”，即样本中磺胺类抗生素含量低于筛选水平；如果样品cpm值等于或小于控制点，视为“初筛怀疑阳性”，此时应重新测定样品、阴性控制液和阳性控制液的cpm值。当阴性控制液和阳性控制液的cpm值在正常范围波动，样本测试结果cpm值大于控制点，判定为“阴性”；若样本cpm值仍等于或小于控制点，则判定样品为“筛选阳性”。

5 测定低限

本标准所确定的方法对动物组织中磺胺类抗生素残留总量的筛选水平分别为：肌肉组织20 ug/kg，肝脏组织50 ug/kg。

6 准确度和精密度

在肌肉组织和肝脏组织中的添加水平分别为20 ug/kg和50 ug/kg时，检测阳性率应达到100％，不应出现假阴性。

7 确证实验

本标准为筛选方法，对于阳性样本，需用其他方法进行确证。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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