3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取蜂王浆10g(精确至0.01g)，置于50 mL容量瓶中，加40 mL稀磷酸溶液在混匀器上混匀，再加入50％三氯乙酸2mL,用稀磷酸定容，轻轻混匀，将溶液转移到离心管中，离心(4000r/min)5min,过滤。取滤液25 mL用饱和氢氧化钠溶液调节pH为2.0，待净化用。

称取蜂王浆冻干粉5g(精确至0.01g)置于离心管中，加入58 mL稀磷酸溶液在混匀器上混匀，再加入50％三氯乙酸2 mL，轻轻混匀，离心(4000r/min) 5 min，过滤。取滤液30 mL用饱和氢氧化钠溶液调节pH为2.0，待净化用。

3.4.2 阳离子交换柱净化

将上述滤液过预先淋洗好的苯磺酸型固相萃取柱．分别用5 mL稀磷酸溶液和10 mL水淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液。用30mL磷酸盐缓冲溶液洗脱链霉素。在洗脱液中加入0.5mol/L庚烷磺酸钠溶液3 mL，摇匀，再用磷酸调节洗脱液pH 3.3。

3.4.3 HLB固相萃取柱净化

将上述溶液过预洗好的HLB固相萃取柱，再用稀磷酸溶液5 mL 淋洗，在真空负压下，减压抽干5 min，弃去全部淋出液。用5 mL 30％甲醇水溶液淋洗HLB固相萃取柱，在真空负压下，减压抽干5 min。用2mL甲醇溶液以1.5mL/min的流速洗脱链霉素，洗脱液在小于45℃水浴上氮气流吹至近干。用0.01mol/L庚烷磺酸钠酸溶液溶解并定容至1.0 mL，溶液供液相色谱测定。

3.4.4 测定

3.4.4.1 色谱条件

a)色谱柱：Lichrospher C₁₈ 5 um, 250 mm×4.6 mm(内径)，或相当的色谱柱；

b)流动相：称取1.10g庚烷磺酸钠和0.052 g 1,2-萘醌-4-磺酸钠，溶于500 mL乙腈和水的混合液(28+72)中，摇匀，用乙酸调节溶液至pH 4.3，当天配制；

c)流速：1.0 mL/min;

d)检测波长：激发波长263 nm，发射波长435 nm;

c)进样量：100uL;

f)柱温：50℃；

g)衍生管:10m×0.25mm(内径)，不锈钢管或peck塑料管；

h)衍生剂：0.2 mol/L氢氧化钠溶液；

i)衍生剂流速：0.2 mL/min;

j)衍生管温度：50℃。

3.4.4.2 色谱测定

根据样液中链霉素残留量，选择浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中链霉素的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参播进样测定。在上述色谱条件下，链霉素的保留时间约为13.3 min。

3.5 空白试验

除不加试样外，均按上述步骤进行。

3.6 结果计算和表述

按式(1)计算试样中链霉素含量，计算结果需扣除空白值。

式中：

X—试样中链霉素的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

A—样液中链霉素的峰面积；

c—标准工作液中链霉素浓度，单位为微克每毫升(ug/mL);

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

A_s—标准工作液中链霉素的峰面积；

m—最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法对蜂王浆的测定低限为0.01mg/kg；对蜂王浆冻干粉的测定低限为0.02 mg/kg。

4.2 回收率

4.2.1 蜂王浆样品的添加浓度及其回收率的实验数据如下：

—在添加0.01 mg/kg浓度水平时，链霉素的回收率范围为83.7%～94.5%;

—在添加0.02 mg/kg浓度水平时，链霉素的回收率范围为90.4%～98.5%;

—在添加0.05 mg/kg浓度水平时，链霉素的回收率范围为86.4～93.8%。

4.2.2蜂王浆冻干粉样品的添加浓度及其回收率的实验数据如下：

—在添加0.02 mg/kg浓度水平时，链霉素的回收率范围为82.0％～94.0％;

—在添加0.05 mg/kg浓度水平时，链霉素的回收率范围为85.4％～96.2%;

—在添加0.10 mg/kg浓度水平时，链霉素的回收率范围为85.6％～96.8％。

相关链接：进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量检测（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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