1 范围

SN/ T 1777的本部分规定了肉类组织、内脏和水产品中大环内酯类抗生素残留的放射受体分析(Charm Ⅱ)方法。

本部分适用于肉类组织、内脏和水产品中大环内酯类抗生素残留的测定方法。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过SN/T 1777的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/ T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 试样的制备与保存

3.1 试样的制备

从全部样品中取有代表性样品，用四分法缩分出不小于1000g试样，剔除脂肪后充分绞碎、混匀、分成两份，装入洁净容器，加封并做标识。

脂肪是干扰物质，应尽可能将其剔除：制样过程应保证萃取前肉类不被微生物污染。

3.2 试样的保存

将样品于-20℃～-18℃条件下保存，新鲜或冷冻的组织样品(内脏除外)可在2℃～6℃贮存72h。

4 测定方法

4.1 原理

放射受体分析(CharmⅡ)方法的基础是药物功能团与微生物受体位点的结合反应，这些位点与某一类抗生素的共有功能团相关。应用受体的这种特异性可以实现对某一类抗生素的多残留分析。本方法中，样品中残留的大环内酯类药物经提取、稀释后与[¹⁴C]标记的红霉素共同竞争结合特异的受体位点。在一定温度反应后，离心分离，清除未结合的大环内酯类药物，最后加入闪烁液测定[14C]衰变发出的β粒子放射性记数cpm (count per minute)。测得的cpm值与样品中大环内酯类抗生素残留量成反比。

4.2 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.2.1 大环内酯类检测试剂盒：

a)组织阴性对照浓缩干粉：干粉贮存于2℃～6℃，使用时取浓缩干粉按标签上标记配制成阴性对照溶液，配制好的溶液可在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存48 h。如长时间不用或估计2d内用不完，可将全部或部分溶液保存于-15℃以下的冰箱中，使用时将其解冻。解冻后的溶液在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存24 h；

b)MSU 多抗生素标准品：干粉贮存于2℃～6℃，使用时取浓缩干粉按标签标记配制成抗生素标准溶液。溶液的保存方法同4. 2.1a)；

c)缓冲溶液干粉：包括肉类组织萃取缓冲溶液(MSU萃取缓冲溶液)干粉和调节pH值的M2缓冲溶液干粉，贮存于2℃～6℃，使用时按标签配制成缓冲液，可在2℃～6℃下保存2个月；

a)大环内酯类受体药片：白色，-15℃以下的条件保存；

e)红霉素氛标记药片：绿色，-15℃以下的条件保存。

4.2.2 闪烁液。

4.2.3 甲醇。

4.2.4 磷酸二氢钠。

4.2.5 磷酸。

4.2.6 磷酸盐缓冲液1：0.1 mol/L磷酸二氢钠(12.4g磷酸二氢钠溶解于1000 mL水)，以磷酸调节pH至2.5。

4.2.7 磷酸盐缓冲液2：0.1 mol/L磷酸二氢钠(12.4g磷酸二氢钠溶解于1000mL水)，以磷酸调节pH至4.0。

4.2.8 磷酸盐缓冲液3：0.1 mol/L磷酸二氢钠(12.4g磷酸二氢钠溶解于1000 mL水)，以磷酸调节pH至9.0。

4.2.9 SCX小柱(3mL)。

4.3 仪器

4.3.1 Charm Ⅱ7600分析仪。

4.3.2 孵育器：55℃±1℃。

4.3.3 离心机：3300 r/min, 6000r/min。

4.3.4 均质器。

4.3.5 移液器：1 mL～5mL，100 uL～1000 uL，300uL，10 uL～100uL。

4.3.6 涡旋振荡器。

4.4 分析步骤

4.4.1 对照液的配制(用于分析仪器和试剂的性能监测)

4.4.1.1 阴性对照液的配制

取2 mL组织阴性对照溶液[4.2.la)]，加至6 mL MSU萃取缓冲溶液[4.2.1c)]中制成阴性对照液，在室温下混匀，该对照液可在室温下保持6h以上。

4.4.1.2 阳性对照液的配制

取0.3 mL抗生素标准溶液[4.2.1b)]，加至7.5 mL组织阴性对照溶液中[4.2.1a)]，然后从中取2 mL混合溶液加入到6 mL MSU萃取缓冲溶液[4.2,lc)]中制成阳性对照液，在室温下混合均匀，该对照液可在室温下保持6h以上。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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