4.4.2 提取

4.4.2.1 肉类组织、水产品

称取均质组织10.0g(精确到0.1g(于50 mL试管中，加入30 mL MSU萃取缓冲液[4.2.1c)]；混合振荡后将试管放置于80℃±2℃温浴45 min，然后冰水浴10 min；于3300r/min条件下离心10 min；取出上清液，注意除去浮在液体表层的脂肪颗粒；用M2缓冲液调节pH值至7.5左右。

4.4.2.2 肝、肾样品

称取2.0g样品(精确到0.1g)于50 mL试管中，加入2 mL磷酸盐缓冲液1(4.2.6)，混合后加入3 mL甲醇和15 mL水，混合振荡10 min, 6000r/min离心10 min，取上清液至SCX柱(4.2.9)(5mL甲醇、5 mL水、5 mL的磷酸盐缓冲液2预活化)，待溶液完全流出后，依次以4 mL水、2 mL磷酸盐缓冲液3(4.2.8)、0.1 mL 30％甲醇洗柱，最后负压抽干柱子，以2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于缓和氮气流下吹干，以6 mL MSU缓冲液溶解吹干物，并加入2 mL组织阴性对照液，用M2缓冲液调节pH值至7.5左右。

4.4.3 测定

4.4.3.1 取出检测试剂片，用压杆将白色受体药片[4.2.ld)]推出到空的试管中，用移液器取300 uL水至试管中，用涡旋振荡器混合10 s将药片打碎。

4.4.3.2 加4 mL样品萃取液或阴性对照液(4.4.1.1)或阳性对照液(4.4.1.2)，用涡旋振荡器混合10 s。

4.4.3.3 将试管置于55℃±1℃的孵育器保温2 min。

4.4.3.4 取出试管，将绿色红霉素氖标记药片[4.2.le)]推至试管中，用涡旋振荡器混合10 s。

4.4.3.5 将试管置于55℃±1℃的孵育器保温2 min。

4.4.3.6 取出试管，在3300r/min的离心力下离心3 min，立即弃去上清液，用吸水物将测试管边缘的水渍吸干。

4.4.3.7 加300uL水，用涡旋振荡器混合10 s将沉淀物打碎。

4.4.3.8 加3 mL闪烁液至试管中，加盖，混匀，在CharmⅡ7600分析仪上以[14C]频道上进行1 min计数(cpm)。

4.5 控制点的确定

控制点是界定样品阴性与初筛阳性的一个界限值，对于同一批号的试剂，正常情况下只需测定一次控制点。在筛选水平红霉素、泰乐菌素100 ug/kg,螺旋霉素、交沙霉素200 ug/kg，替米考星50 ug/kg时，控制点设置如下：

—对于肉类组织和水产品，称取10 g空白样品，加入100 uL MSU多抗生素标准品[4.2.1b)];

—对于内脏，称取2g空白样品，加入20uL MSU多抗生素标准品[4.2.lb)]。

按照4.4.2.1或4.4.2.2进行前处理，再按4.4.3进行测试。取6个加标样品平行测试的cpm读数平均值，乘以系数1.2作为筛选测定的控制点。

还可根据所需的筛选水平重新设置相应的控制点。

5 结果判定

当样品测定cpm值比控制点大，可判定为样品“阴性”，即样品中大环内醋类抗生素残留小于筛选水平：若测定cpm值小于或等于控制点，应判定为初筛阳性，若有必要可进行重复实验。

6 分析仪性能监测

通常要为每一批新的检测试剂建立一个零控制点。零控制点，就是6次阴性对照液测定结果的平均值。当遇到样品“初筛阳性”时，通过测定阴性对照液和阳性对照液的cpm值，并与控制点进行比较，可确定试剂和仪器是否工作正常。原则是：

a)正常情况下，阴性对照液测定结果一般在零控制点左右波动，幅度约±20％;

b)正常情况下，已知阴性样品测定结果一般在零控制点左右波动，幅度约±25％;

c)正常情况下，阳性对照液测定结果小于控制点；

d)如果以上条件均不符，应重新测定零控制点和控制点，并重新测定样品。

7 确证试验

如被测样品中大环内酯类抗生素残留筛选结果为阳性的，应用其他方法进行确证。

8 测定低限

本方法测定低限：

—肉类中红霉素和泰乐菌素为100 ug/kg，交沙霉素和螺旋霉素为200 ug/kg，替米考星为50 ug/kg；

—水产品中红霉素和泰乐菌素为100 ug/kg，交沙霉素和螺旋霉素为200 ug/kg；

—内脏中红霉素、泰乐菌素和替米考星为100 ug/kg，交沙霉素和螺旋霉素为200 ug/kg。

相关链接：动物源性食品中大环内酯类抗生素残留测定方法 第1部分：放射受体分析法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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