3.7 酶联免疫法检测

3.7.1 标准曲线的制备

用磷酸盐缓冲液稀释10 mg/L的磺胺药物标准溶液储备液至100 ug/L，用PBS对100 ug/L的磺胺药物标准溶液进行1:3梯度稀释，得到一系列不同浓度的磺胺药物标准溶液(100 ug/L, 33.3 ug/L，11.1 ug/L，3.7 ug/L，1.2 ug/L，0.4 ug/L)。

3.7.2 样品测定

在酶标板中分别加入100uL才不同浓度的磺胺药物标准溶液和样品待测液；在空白和对照孔中分别加入100 uL的水；除空白孔外，在每个孔中加入100 uL的酶标记物稀释液；空白孔中则加入100 uL磷酸盐缓冲液；轻拍混匀，用粘胶纸封住微孔以防溶液挥发，室温孵育60 min。弃掉酶标板中的液体，用洗涤液洗板三次。加入混合好的底物液150uL，轻轻混匀，室温放置30 min后，每个孔加入50 uL的终止液，轻轻晃动酶标板，10 min内在酶标仪上读出每孔450 nm吸光值。

3.8 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.9 结果的计算

3.9.1 计算抑制率值

按式(1)计算不同浓度磺胺药物对抗原抗体结合反应的抑制率：

式中：

IC—磺胺药物对抗原抗体结合反应的抑制率，％；

A_对照—不加入磺胺药物标准液，仅加入酶标记稀释物和磷酸盐缓冲液，在450 nm下测得的平均吸光度值；

A_样品—磺胺药物标准液或样液在450 nm下的平均吸光度值；

A_空白—不加入酶标记稀释物及磺胺药物标准液，仅加入水和磷酸盐缓冲液，在450 nm下测得的平均吸光度值。

3.9.2 绘制标准曲线

以抑制率为纵坐标，磺胺药物浓度为横坐标(横坐标取对数刻度)绘制标准曲线。

3.9.3 结果计算

从标准曲线上读取样液抑制率所对应的磺胺药物浓度(c)，按式(2)计算试样中的磺胺药物残留量：

X＝c×R······(2)

式中：

X—某种磺胺药物残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—根据样品孔的抑制率查得试样中磺胺药物浓度，单位为微克每升(ug/L) ;

R—某类样品换算系数(分别为：猪肉：20；鸡肉：20；猪肝：20；鸡蛋：20；牛奶：40；鱼：20)。

相关链接：进出口动物源性食品中磺胺类药物残留量的检测方法（二）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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