7 测定步骤

7.1 提取

称取5g(精确到0.01g)匀浆样品和5g无水硫酸钠(5.16)于50 ml.玻璃离心管中，加入20 mL二氯甲烷，匀质提取30 s，以3500 r/min离心5 min，上清液经漏斗(用脱脂棉垫底，加1g无水硫酸钠)过滤到100 mL棕色梨形瓶中，另取一只50 mL玻璃离心管加入20 mL二氯甲烷，洗涤匀浆刀头10 s,洗涤液移入前一离心管中，用玻棒搅动残渣，超声波振荡提取5 min，以3500 r/min离心5 min，上清液经上述漏斗过滤合并至100 mL棕色梨形瓶中，38℃减压旋转蒸发至干。

7.2 净化

7.2.1 鳗鱼

棕色梨形瓶中的残渣用750 uL乙腈溶解，旋涡振荡混匀，超声10s，再加入750 uL 5％乙酸水溶液，旋涡振荡混匀，将样品溶液转移至玻璃试管中，加入3 mL 乙腈饱和正己烷(5.8)旋涡振荡混合30 s,以3500 r/min离心5 min，弃掉上层的正己烷，原玻璃试管中再加3 mL乙腈饱和正己烷旋涡振荡混合30 s，以3500 r/min离心自5 min，弃掉上层的正己烷，下层过0. 45 um有机相滤膜后供液相色谱测定。

7.2.2 烤鳗

棕色梨形瓶中的残渣用1.50 mL乙腈溶解，旋涡振荡混匀，超声10 s，再加入1.50 mL 5％乙酸水溶液溶解，旋涡振荡混匀，将样品溶液转移至玻璃试管中，加入3 ml 乙腈饱和正己烷旋涡振荡混合30 s，以3 500 r/min离心5 min，弃掉上层的正己烷，原玻璃试管中再加3 mL乙腈饱和正己烷旋涡振荡混合30 s，以3500 r/min离心5 min，取下层1.50 mL，加5 mL 0.1 mol/L盐酸水溶液，过阳离子交换固相萃取柱(5.15)，控制流速小于0.4 mL/min，依次用2 mL 0.1 mol/l.盐酸水溶液、2 mL甲醇淋洗，12 mL乙腈+甲醇+5 mol/L乙酸铵水溶液(5.14)洗脱，控制洗脱液流速小于0.6 mL/min，收集洗脱液开转移到25 mL棕色鸡心瓶，38℃减压旋转蒸发近干，用乙腈＋水(5.11)定容至1.00 mL，过0.45 um有机相滤膜后供液相色谱测定。

7.3 测定

7.3.1 测定液相色谱条件

7.3.1.1 色谱柱：C₁₈柱，5 um, 250 mm×4.6 mm(内径)。

7.3.1.2 流动相

7.3.1.2.1 鳗鱼测定流动相：

A为甲醇,B为1％乙酸水溶液，梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相为甲醇-1％乙酸水溶液时的梯度洗脱程序

7.3.1.2.2 烤鳗测定流动相

A为乙腈,B为1％乙酸水溶液，梯度洗脱程序见表2。

表2 流动相为乙腊-1％乙酸水溶液时的梯度洗脱程序

7.3.1.3 流速：1.0 mL/min。

7.3.1.4 检测波长：265nm。

7.3.1.5 柱温：35℃。

7.3.1.6 进样量：30uL。

7.3.2 色谱测定

根据样液中磺胺类药物的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液，标准工作溶液和待测样液中磺胺类药物的响应值均应在仪器线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，七种磺胺的参考保留时间见表3和表4。

表3 流动相为甲醇-1％乙酸水溶液时七种磺胺的参考保留时间

表4 流动相为乙腈-1％乙酸水溶液时七种磺胺的参考保留时间

7.3.3 空白试验

除不加样品外，均按上述测定步骤进行。

相关链接：鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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