1 范围

本标准规定了蜂王浆中氯霉素残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆中氯霉素残留量的检测。

2 方法提要

样品用甲醇沉淀蛋白质，再用乙酸乙酯提取，经硅胶和Oasis HLB固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定和确证，同位素内标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 乙酸乙酯：高效液相色谱级。

3.2 甲醇：高效液相色谱级。

3.3 甲苯：高效液相色谱级。

3.4氯化钠。

3.5 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在于燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

3.6 甲醇水溶液：甲醇-水(2+8，体积比)。

3.7 甲苯-乙腈(9+1，体积比)。

3.8 甲苯-乙腈(4+6，体积比)。

3.9 氯霉素标准品(chloramphenicol, CAS NO.56-75-7,C₁₁H₁₂Cl₂N₂O₅)：纯度大于等于99％。

3.10 氯霉素-d_⁵标准品：纯度大于等于99%。

3.11 氯霉素标准储备溶液：称取适量标准品(3.9)，用甲醇溶解，溶液浓度为100 ug/mL。 1℃～4℃冷藏保存。有效期6个月。

3.12 氯霉素-d_⁵标准储备溶液：称取适量标准品(3.10)，用甲醇溶解，溶液浓度为100 ug/mL。1℃～4℃冷藏保存。有效期6个月。

3.13 标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成0.04 ng/mL，0.12 ng/mL、0.24 ng/mL、0.32 ng/mL、0.64ng/mL的标准工作溶液，相当于样品中含有0.1 ug/kg、0.3 ug/kg、0.6 ug/kg、0.8 ug/kg、1.6ug/kg氯霉素，同位素内标氯霉素-d5浓度均为0.25 ng/mL。

3.14 无水硫酸钠柱：80 mm×40 mm(内径)筒形漏斗，底部垫5 mm脱脂棉，再装40 mm无水硫酸钠。

3.15 硅胶固相萃取柱：500 mg或相当者，使用前用10 mL甲苯-乙腈(9+1，体积比)预洗。

3.16 Oasis HLB固相萃取柱：500 mg，或相当者，使用前用甲醇7 mL和水10 mL预洗。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

4.2 旋转蒸发器。

4.3 旋涡混合器。

4.4 固相萃取装置。

4.5 高速离心机：7000r/min。

4.6 氮吹仪。

5 试样制备与保存

取500 g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在-18℃保存。

在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取

称取4g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞离心管中，准确加入0.5 mL氯霉素-d5(5 ng/mL)内标溶液和15 mL水，混匀，静置5 min，加甲醇至30.0 mL，于旋涡混合器上以2000 r/min，混匀1 min，以6000r/min离心5 min，移取15.0mL上层液置于另一个50 mL具塞离心管中，加入2g氯化钠和20 mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀1 min，以4000r/min离心5 min，将上层乙酸乙酯过无水硫酸钠柱(3.14)收集于浓缩瓶中，再加入20 mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液，再用5 mL乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠柱，在40℃以下水浴减压浓缩至近干。

6.2 净化

用10 mL乙腈-甲苯(1+9，体积比)溶液溶解残渣，将溶解液分次转移至硅胶净化柱(3.15)中，弃去流出液，用6 mL乙腈-甲苯(6+4，体积比)洗脱，在50℃以下水浴下平缓氮气吹于，加入5 mL水溶解残渣，将溶液转移至Oasis HLB柱(3.16)中，再用10 mL水和5 mL甲醇水溶液(3.6)依次洗涤离心管，洗涤液过固相萃取小柱，弃去流出液。在负压下减压抽干，最后用5 mL甲醇洗脱，控制流速1 mL/min～2 mL/min，收集全部洗脱液于10 mL离心管中，洗脱液在50℃以下水浴下平缓氮气吹至约2.5 mL，用水定容至5.0 mL，混匀，将溶液通过0.45um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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