1 范围

本标准规定了进出口蜂王浆中林可酰胺类药物残留量测定的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆中林可霉素、氯林可霉素和吡利霉素残留量的测定。

2 规范性引用文件

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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 方法提要

用甲醇沉淀样品中蛋白质，上清液加磷酸盐缓冲溶液稀释后，C₁₈固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：高效液相色谱级。

4.2 甲醇：高效液相色谱级。

4. 3 甲酸：高效液相色谱级。

4.4 氢氧化钠。

4.5 0.1 mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，并用水稀释至1 L。

4.6 甲醇水溶液：甲醇＋水(3+7，体积比)。

4.7 磷酸盐缓冲溶液：溶解13.8g磷酸二氢钠于950 mL水中，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH值到8.0，最后用水稀释至1 L。

4.8 林可霉素盐酸盐(Lincomycin hydrochloride monhydrate, CAS No. 859-18-7，分子式C₁₈H₃₄N₂O₆ SxHCI)标准品：纯度大于等于99.5 %。氯林可霉素盐酸盐(Clindamycin hydrochloride,CAS No. 21462-39-5，分子式C₁₈H₃₃ CIN₂O₅SxHCl)标准品：纯度大于等于94.5%。吡利霉素盐酸盐(Pirlimycin hydrochloride, CAS No.79548-73-5，分子式C₁₇H₃₁CIN₂O₅ SxHCl)标准品：纯度大于等于86.4％。

4.9 林可霉素、氯林可霉素、吡利霉素标准储备溶液：分别称取经折算适量标准品(4.8)，分别用甲醇溶解定容至100 mL，溶液浓度为100 ug/mL,1℃～4℃冰箱保存。有效期3个月。

4.10 空白样品提取液：用不含林可酰胺类药物的蜂王浆样品。

4.11 标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液(4.10)将标准储备液稀释成浓度为2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有2 ug/kg、5 ug/kg、10 ug/kg、50 ug/kg、100 ug/kg林可酰胺类药物。

4.12 C₁₈固相萃取小柱，500 mg, 3 mL或相当者。使用前依次用5 mL甲醇,5 mL水预洗。

4.13 微孔滤膜：0.45 um，有机相。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2 天平：感量为0.0001g和0.001g。

5.3 固相萃取装置。

5.4 离心机：大于等于6000 r/min,

5.5 pH计：测量精度±0.02pH单位。

5.6 旋涡混合器。

5.7 减压浓缩仪

5.8 具塞离心管：聚四氟乙烯,50 mL。

6 试样制备与保存

取500 g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在-18℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

称取2g试样(精确到0.01g)置于50 mL离心管中，加10 mL，水，混匀，静置2 min，再加甲醇至20 mL，于旋涡混合器上以2000r/min混匀1 min，以6000r/min离心10 min，过滤，移取10.0mL上清液，加10 mL磷酸盐缓冲溶液(4.7)稀释，混匀。

7.2 净化

将溶液转移至C₁₈固相萃取小柱中(4.12)，再用5 mL水和5 mL甲醇水溶液(4.6)依次洗涤浓缩瓶，洗涤液过固相萃取小柱，弃去流出液，抽干，用6 mL甲醇洗脱，控制流速1 mL/min～2 mL/min，收集全部洗脱液于10 mL离心管中，洗脱液在50℃以下水浴下减压浓缩至近干，用1.0 mL甲醇-水(1+1，体积比)溶解残渣，混匀，溶液过0.45 um,滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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