1 范围

本标准规定了蜂王浆磺胺类药物残留的放射受体分析(Charm Ⅱ)方法。

本标准适用于蜂王浆中磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对二甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺噁喹啉、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺异噁唑 ,磺胺二甲基异噁唑、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺苯吡唑和磺胺甲噻二唑等磺胺类药物残留总量的测定。

2 规范性引用文件

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GB/ T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 方法提要

放射受体分析(Charm Ⅱ)方法的基础是药物功能团与微生物受体位点的结合反应，这些位点与某一类药物的共有功能团相关。应用受体的这种特异性可以实现对某一类药物的多残留分析。本方法中，样品中残留的磺胺类药物经提取、稀释后与［³H］标记的药物共同竞争结合特异的受体位点。在一定温度下反应后，离心分离，清除未结合的磺胺类药物，最后加入闪烁液，测定［³H］衰变发出的β粒子放射性量值，计数cpm(count per minute)，测得的cpm值与样品中磺胺类药物残留量成反比。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 磺胺类检测试剂盒。

4.1.1 组织阴性对照浓缩干粉：组织阴性对照浓缩干粉贮存于2℃～6℃。

4.1.2 MSU多抗标准品浓缩干粉：浓缩干粉贮存于2℃～6℃。

4.1.3 组织萃取缓冲溶液(MSU萃取缓冲溶液)干粉：贮存于2℃～6℃。

4.1.4 M2缓冲溶液干粉：用于调节pH值，贮存于2℃～6℃。

4.1.5 磺胺类受体药片：白色，-15℃以下的条件保存。

4.1.6 磺胺类氚标记药片：粉红色，-15℃以下的条件保存。

4.2 组织阴性对照溶液：使用时取组织阴性对照浓缩干粉(4.1.1)按试剂盒说明书配制成阴性对照溶液。配制好的溶液可在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存48 h。如长时间不用，可将溶液保存于-15℃以下的冰箱中，使用时将其解冻。再解冻的溶液在2℃～6℃温度下可保存24 h。

4.3 MSU多抗标准溶液：使用时取浓缩干粉(4. 1. 2)按试剂盒说明书配制成多抗生素标准溶液。溶液的保存方法同4.2。多抗标准品中含磺胺二甲嘧啶1 000 ng/mL。

4.4 组织萃取缓冲溶液(MSU萃取缓冲溶液)：使用时取浓缩干粉(4.1.3)按试剂盒说明书配制成组织萃取缓冲液。可在2℃～6℃下保存2个月。

4.5 M2缓冲溶液：使用时取浓缩干粉(4.1.4)按试剂盒说明书配制成M2缓冲液。可在2 0C～6℃下保存2个月。

4.6 Optifluorx闪烁液。

4.7 阴性对照液：取2 mL组织阴性对照溶液(4.2)，加至6 mL组织萃取缓冲溶液(4.4)中制成阴性对照液，在室温下混匀，该对照液可在室温下保持6h以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。

4.8 阳性对照液：取0.3 mL多抗生素标准溶液(4.3)，加至15 mL组织阴性对照溶液中(4.2)，混匀；然后从中取2 mL混合溶液加入到6 mL MSU萃取缓冲溶液(4.4)中制成阳性对照液(磺胺二甲嘧啶浓度1.25 ng/mL)；在室温下混合均匀。该对照液可在室温下保持6h以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。

4.9 1 mol/L盐酸：取83 mL分析纯浓盐酸加蒸馏水定容至1 000 mL。

4.10 30%氢氧化钠溶液：称取30 g氢氧化钠溶于水中，定容至100 mL。

4.11 甲醇：分析纯。

4.12 pH试纸：范围5～100

4.13 C₁₈固相萃取柱：3 mL、60 mg。

4.14 空白基样：选取确认不含有磺胺类药物的蜂王浆，作为空白基样，用于测定当次批次试剂盒的控制点使用。

5 仪器

5.1 Charm II 7600分析仪或相当者。

5.2 孵育器。

5.3 高速冷冻离心机：6 000 r/min,

5.4 均质器。

5.5 单道移液器：10 uL～100 uL、100uL～1000 uL和2 mL～10 mL。

5.6 涡旋混合器。

5.7 电子天平：0.01g～100g。

5.8 氮吹仪。

5.9 固相萃取仪。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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