3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取40 g试样(精确到0.1g)于500 mL蒸馏瓶中，加入150 mL氢氧化钠溶液(0.03 mol/L)，于100℃水浴中加热回流1h。用少量水洗涤冷凝器，洗液合并于蒸馏瓶中，冷却后抽滤。用氢氧化钠溶液(0.03 mol/L)洗涤蒸馏瓶及滤纸上的残渣。合并滤液和洗液，并用氢氧化钠溶液(0.03 mol/L)定容至200 mL。

吸取10 mL上述样液(相当于2g样品)于100 mL离心管中，加入1 mL硫酸溶液((3 mol/L)，轻微旋摇后加入10 mL水。然后加入25 mL乙酸乙酯，盖塞，剧烈振摇约2 min，于2500 r/min离心约3 min。将上层溶液转移至另一个100 mL离心管中。向第一个管中再加入15 mL乙酸乙酯，重复上述操作。合并乙酸乙酯提取液，再分别用20 mL,10 mL磷酸氢二钠溶液(2％)进行两次液-液提取。弃去乙酸乙酯层，合并水层于100 mL的离心管中。于水层中加入2 mL盐酸溶液(12 mol/L),5 g氯化钠，30 mL乙酸乙酯。激烈振荡约2 min，离心，分取有机层。在水层中再加15 mL乙酸乙酯，同上述操作，分取有机层，合并于同一容器。适量无水硫酸钠脱水后，将该有机层转移至250 mL心形瓶中，于40℃水浴旋转浓缩至近干。

3.4.2甲酯化

向上述心形瓶中加入2 mL甲酯化剂(3.2.13)，充分溶解残留物，将溶液转移至25 mL密封试管中，旋紧盖，于70℃水浴酯化1.5h。冷却后，加入10 mL硫酸钠溶液(2％)，分别用5 mL乙酸乙酯提取两次。合并乙酸乙酯层，经适量无水硫酸钠脱水后，于40℃水浴旋转浓缩至近干。

3.4.3 净化

加入1 mL乙腈于上述残渣中，溶解。再加4 mL水，混匀。将该溶液注入净化柱(3.3.7)。依次用5 mL水，5 mL洗脱液〔3.2.12a)〕洗涤，弃去流出液。最后用2.0mL洗脱液〔3.2.12b)〕进行洗脱，收集洗脱液供液相色谱测定。

3.4.4 对苯二甲酸标准工作溶液的处理

准确吸取适当浓度的对苯二甲酸标准工作溶液于一个25 mL密封试管中，用氮气流将溶剂吹除，按3.4.2甲酯化后，用2.0 mL洗脱液〔3-2-12b〕溶解后供液相色谱测定。

3.4.5 测定

3.4.5.1 色谱条件

a)色谱柱：Adsorbosphere XL C₁₈ , 250 mm×4.6 mm(内径)，5 um，或相当者。

b)流动相：乙腈-水(5+5)。配制后，经0.45 um滤膜抽滤，脱气。

c)流速：0.7mL/min。

d)柱温：25℃。

e)检测波长：242 nm。

f)进样量：20 uL。

3.4.5.2 色谱测定

根据样液中对苯二甲酸二甲酯含量情况，选定峰高相近的对苯二甲酸二甲酯标准工作溶液。标准工作溶液和样液中对苯二甲酸二甲酯响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，对苯二甲酸二甲酯的保留时间约为11 min。

3.4.6 空白试验

除不加试样外，均按上述步骤进行。

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中对酞酸铜残留含量：

式中：X—试样中对酞酸铜残留含量,mg/kg;

h—样液中对苯二甲酸二甲酯的峰高，mm;

h_g—标准工作溶液中对苯二甲酸二甲酯的峰高，mm;

c—标准工作溶液中对苯二甲酸的浓度，ug/mL;

V最终样液的体积，mL;

m—最终样液所相当的试样量，g；

1.371—对酞酸铜[C₆H₄(COO)₂Cu]与对苯二甲酸[C₆H₄(COON)₂]分子量之比(即227.7/166.1=1.371)。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.5 mg/kg。

4.2 回收率

对酞酸铜添加浓度及其回收率的实验数据：

在柑桔中，浓度在0.5 mg /kg时，回收率为86.8％;

浓度在5.0 mg/kg时，回收率为91.7％;

浓度在10.0 mg/kg时，回收率为88.8％。

在苹果中，浓度在0.5 mg /kg时，回收率为83.5％;

浓度在5.0 mg /kg时，回收率为86.2％;

浓度在10.0 mg/kg时，回收率为85.1％。

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法上》

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