9 原理

亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗 体选择性的与黄曲霉毒素M₁(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗 脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液 中黄曲霉毒素M₁含量。

10 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

10.1 免疫亲和柱：亲和柱的最大容量不小于100ng黄曲霉毒素M1(相当于50mL浓度为2 ug/L的试样)， 当标准溶液含有4 ng黄曲霉毒素M1(相当于50mL浓度为80ng/L的试样)时回收率不低于80%。应该定期 检查亲和柱的柱效和回收率，对于每个批次的亲和柱至少检查一次(见10.1.1和10.1.2)。

10.1.1 柱效检查

用移液管(11.4)移取1.0mL的黄曲霉毒素M1标准储备液(10.5.2)到20mL的锥形试管中(11.9)。用恒流的氮气(10.3)将液体慢慢吹干，然后用l0mL 10%的乙腈水溶液(10.2.2)溶解残渣，用力摇荡。

将该溶液加入到40mL的水中，充分混匀，全部通过免疫亲和柱(10.1)。按说明书要求使用免疫 亲和柱。淋洗免疫亲和柱后，洗脱黄曲霉毒素M1。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定 免疫亲和柱键合的黄曲霉毒素M1含量。

计算黄曲霉毒素M1的回收率，将其结果与10.1中所要求的指标进行比较。

10.1.2 回收率检查

用移液管(11.4)移取0.8mL 0.005 ug/mL的黄曲霉毒素M1标准工作液(10.5.3)到10 mL的水中， 充分混匀，全部通过免疫亲和柱。按说明书使用免疫亲和柱。淋洗免疫亲和柱，洗脱下黄曲霉毒素M1。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定免疫亲和柱键合的黄曲霉毒素M1含量。计算黄曲霉毒素M1的回收率，将其结果与10.1中所要求的指标进行对比。

10.2 乙腈(CH₃CN)：色谱纯。

10.2.1 25%乙腈水溶液：将250 mL的乙腈(10.2)与750mL的水混溶(使用前需要脱气。

10.2.2 10%乙腈水溶液：将100mL的乙腈(10.2)与900mL的水混溶(使用前需要脱气)。

10.3 氮气(N₂)。

10.4 三氯甲烷：加入0.5%～1.0%质量比(与三氯甲烷质量比)的乙醇进行稳定。

10.5 黄曲霉毒素M1标准溶液，纯度≥98%。

10.5.1 浓度的校正

黄曲霉毒素M₁三氯甲烷标准溶液浓度为10ug/mL。根据下面的方法，在最大吸收波段处测定溶液 的吸光度，以确定黄曲霉毒素M1的实际浓度。

用分光光度计(11.11)在340nm～370nm处测定，扣除三氯甲烷的空白本底，读取标准溶液的吸 光度值。在接近360nm最大吸收波段λ_max处，测得吸光度值为A,根据式(2)计算浓度值：

式中：

c_i—黄曲霉毒素M1实际浓度，单位为微克每毫升(ug/mL)；

A—在λ_max处测得的吸光度值；

M—328g/mol,黄曲霉毒素M1摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)；

ε—19950,溶于三氯甲烷中的黄曲霉毒素M₁的吸光系数，单位为平方米每摩尔(m²/mol)。

10.5.2 标准储备液

确定黄曲霉毒素M₁标准溶液的实际浓度值后(10.5.1),继续用三氯甲烷将其稀释为浓度为0.1ug/mL的储备液。储备液密封后于冰箱中5℃以下避光保存。在此条件下，储备液可以稳定两个月。

10.5.3 黄曲霉毒素M1标准工作液

从冰箱中取出标准储备液(10.5.2)放置至室温，移取一定量的储备液进行稀释制备成工作液。工作液临用前配制。

黄曲霉毒素M1标准工作液配制：用移液管(11.4)准确移取1.0mL的储备液(10.5.2)到20mL 的锥形试管中(11.9),用和缓的氮气(10.3)将溶液吹干，然后用20.0mL 10%的乙腈水溶液(10.2.2) 将残渣重新溶解，30min内振摇，混匀，配成浓度为0.005ug/mL的黄曲霉毒素M1标准工作液。在用 氮气对储备液吹干的过程中，一定要仔细操作，避免因温度降低太多而出现结露。

在作标准曲线时，黄曲霉毒素M₁的进样绝对含量分别是0.05ng、0.1ng、0.2ng、0.4ng。根据高 效液相色谱仪进样环的容积量，用工作液配置一系列适当浓度的黄曲霉毒素M₁标准溶液，稀释液用10%乙腈水溶液(10.2.2)。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。