11仪器和设备

11.1 一次性注射器：10mL～50mL。

11.2 真空系统。

11.3 离心机：转速≥7000转/分钟。

11.4 移液管：1.0 mL、2.0 mL和50.0 mL。

11.5 玻璃烧杯：250 mL。

11.6 容量瓶：100 mL。

11.7 水浴：温控30℃±2℃, 50℃±2℃,温度范围36℃±1℃。

11.8 滤纸：中速定性滤纸。

11.9 带刻度的磨口锥形玻璃试管：5mL、10 mL、20 mL。

11.10 高效液相色谱仪

11.10.1 无脉冲泵：适合恒定体积流量约1mL/min的泵。

11.10.2 进样系统：具有固定或可变容积的进样环，进样体积50uL～500uL。

11.10.3 反相色谱柱：填充3um或者5um的十八烷基硅胶，加有填充反相材料的保护柱。

11.10.4 荧光检测器：具有365nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能够测定0.02ng 的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪声)。

11.11 紫外分光光度计：波长范围为200nm～400nm。

11.12 天平：感量为0.01g。

12 分析步骤

所有的操作分析均应在避光条件下进行。

12.1 试样制备

12.1.1 乳：将试样在水浴(11.7)中加热到35℃～37℃。用滤纸(11.8)过滤(根据情况，可以使用多 层滤纸进行过滤)，或者在7000转/分钟离心15 min。至少收集50mL试样，按照12.4继续操作。

12.1.2 乳粉：称取10g样品(精确到0.1g),置于250 mL的烧杯(11.5)中。将50 mL已预热到50℃的 水多次少量地加入到乳粉中，用搅拌棒将其混合均匀。如果乳粉不能完全溶解，将烧杯在50℃的水浴(11.7)中放置至少30 min,仔细混匀。将溶解的乳粉冷却至20℃后，移入100mL容量瓶(11.6)中，用 少量的水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶中，再用水定容至刻度。用滤纸(11.8)过滤乳，或者 在7000转/分钟下离心15min,至少收集50mL的乳试样，按照12.4继续进行分析。

12.1.3 发酵乳：按照“免疫亲和层析净化液相色谱串联质谱法”中6.1.2的前处理方法进行。

12.1.4 干酪：按照“免疫亲和层析净化液相色谱串联质谱法”中6.1.4的前处理方法进行。

12.1.5 奶油：按照“免疫亲和层析净化液相色谱串联质谱法”中6.1.5的前处理方法进行。

12.2 免疫亲和柱的准备

将一次性的50mL注射器筒(11.1)与亲和柱(10.1)的顶部相连，再将亲和柱与真空系统(11.2) 连接起来。

12.3试样的提取与纯化

用移液管移取50mL试样(12.1.1或12.1.2)到50mL注射器(11.1)中，调节真空系统(11.2), 控制试样以2 mL/min～3mL/min稳定的流速过柱。

取下50mL的注射器，装上10mL注射器。注射器内加入10 mL水，以稳定的流速洗柱，然后，抽干亲和柱。

脱开真空系统，装上另一个10 mL注射器，加入4mL乙腈(10.2)。缓缓推动注射器栓塞，通过柱 塞控制流速，洗脱黄曲霉毒素M1，洗脱液收集在锥形管(11.9)中，洗脱时间不少于60 s。然后用和缓的氮气(10.3)在30℃下将洗脱液蒸发至体积为50nL～500uL(如果蒸发至干，会损失黄曲霉毒素M1）。 再用水稀释10倍至最终体积为Vf (即500uL～5000uL)。

注：如果注入高效液相色谱仪含黄曲霉毒素M1的样品，乙腈含量超过10%,色谱峰变宽。如果水含量超过90%, 则对色谱峰的形状没有影响。

相关链接：乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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