20 原理

利用酶联免疫竞争原理，样品中残留的黄曲霉毒素M1与定量特异性酶标抗体反应，多余的游离酶 标抗体则与酶标板内的包被抗原结合，通过流动洗涤，加入酶显色底物显色后，与标准点比较定性。

21 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

21.1 黄曲霉毒素M1双流向酶联免疫试剂盒，2℃～7℃保存。

21.1.1 黄曲霉毒素M1系列标准溶液。

21.1.2 酶联免疫试剂颗粒(含特异性酶标抗体)。

21.1.2.1 抗黄曲霉毒素M1抗体。

警告：不应破损，否则立即销毁。

21.1.2.2 酶结合物。

21.1.3 酶显色底物。

22 仪器和设备

22.1 样品试管，带有密封盖，内置酶联免疫试剂颗粒(21.1.2)。

22.2 移液器(管)，450 uL±50 uL。

22.3 酶联免疫检测加热器，40℃±5℃。

22.4 双流向酶联免疫检测读数仪。

23 分析步骤

23.1 加热器(22.3)预热到45℃±5℃,并至少保持15 min。

23.2 液体试样或乳粉试样复原后振摇混匀，移取450uL至样品试管(22.1)中，充分振摇，使其中的酶联免疫试剂颗粒(21.1.2)完全溶解。

23.3 将样品试管(22.1)和酶联免疫检测试剂盒(21.1)同时置于预热过的加热器内保温，保温时间5 min～6 min。使试样中的黄曲霉毒素M1和酶联免疫试剂颗粒中的酶标记黄曲霉毒素M1抗体结合。

23.4 将样品试管内的全部内容物倒入试剂盒(21.1)的样品池中，样品将流经“结果显示窗口”向绿 色的激活环流去。

23.5 当激活环的绿色开始消失变为白色时，立即用力按下激活环按键。

23.6 试剂盒(21.1)继续放置在加热器(22.3)中保温保持4min,使显色反应完成。

23.7 将试剂盒从加热器中取岀水平放置，立即进行检测结果判读，结果判读应在lmin内完成。

24 分析结果的表述

24.1 目测判读结果

试样点的颜色深于质控点，或两者颜色相当，检测结果为阴性。 试样点的颜色浅于质控点，检测结果为阳性。

24. 2 双流向酶联免疫检测读数仪判读结果

数值≤1.05,显示Negative,检测结果为阴性。 数值＞1.05,显示Positive,检测结果为阳性。 注:阳性样品需用第一法定量检测方法进一步确认。

25 其他

本标准第一法的定量限为0.01ug/kg(以乳计)；第二法乳粉中黄曲霉毒素M1的最低检测限为0.08ug/kg，乳中黄曲霉毒素M1的最低检测限为0.008ug/L；第三法乳中的黄曲霉毒素M1的检出限为0.1ug/L，乳粉中黄曲霉毒素M₁的检出限为0.1ug/kg；第四法的检出限为0.5ug/kg。

相关链接：乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—免疫层析净化荧光分光度法（二）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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