6 分析步骤

6.1 凯氏定氮法

6.1.1 试样处理：称取充分混匀的固体试样0.2g～2g、半固体试样2g～5g或液体试样10g～25g(相当于30 mg～40 mg 氮),精确至0.001g,移入干燥的100mL、250 mL或500 mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜(4.1)、6g硫酸钾(4.2)及20mL硫酸(4.3),轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内 液体微沸，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，再继续加热0.5h～1h。取下放冷，小心加入20 mL水。放 冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。 同时做试剂空白试验。

6.1.2 测定：按图1装好定氮蒸镏装置，向水蒸气发生器内装水至2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红乙醇溶液(4.13)数滴及数毫升硫酸(4.3),以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持 沸腾。

6.1.3 向接收瓶内加入10.0mL硼酸溶液(4.10)及1滴～2滴混合指示液(4.16),并使冷凝管的下端 插入液面下，根据试样中氮含量，准确吸取2.0 mL～10.0mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10mL 水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。将10.0mL氢氧化钠溶液(4.11)倒入小玻杯， 提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸镏。 蒸镏10min后移动蒸镏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸镏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端 外部，取下蒸镏液接收瓶。以硫酸或盐酸标准滴定溶液(4.12) 滴定至终点，其中2份甲基红乙醇溶液(4.13) 与1份亚甲基蓝乙醇溶液(4.14)指示剂，颜色由紫红色变成灰色，pH 5.4；1份甲基红乙醇溶液(4.13) 与5份溴甲酚绿乙醇溶液(4.15) 指示剂，颜色由酒红色变成绿色，pH 5.1。同时作试剂空白。

1—电炉；2—水蒸气发生器(2L烧瓶)；3—螺旋夹；4—小玻杯及棒状玻塞；5—反应室；6—反应室外 层；7—橡皮管及螺旋夹；8—冷凝管；9-蒸镏液接收瓶。

6.2自动凯氏定氮仪法

称取固体试样0.2g～2g、半固体试样2g～5g或液体试样10g～25g(相当于30mg～40mg氮)， 精确至0.001g。按照仪器说明书的要求进行检测。

7 分析结果的表述

试样中蛋白质的含量按式(1)进行计算。

式中：

试样中蛋白质的含量，单位为克每百克(g/100g);

V₁—试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升(mL);

V₂—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升(mL);

V₃—吸取消化液的体积，单位为毫升(mL)；

酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；

0.0140——1.0mL 硫酸［c(1/2H₂SO₄)=1.000mol/L］或盐酸［c(HC1)=1.000mol/L］标准滴定溶液 相当的氮的质量，单位为克(g);

m—试样的质量，单位为克(g);

F—氮换算为蛋白质的系数。一般食物为6.25；纯乳与纯乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高 粱为6.24；花生为5.46；大米为5.95；大豆及其粗加工制品为5.71；大豆蛋白制品为6.25；肉与肉制品 为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；复合配方食品为6.25。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量＞1g/100g时，结果保留 三位有效数字；蛋白质含量<1g/100g时，结果保留两位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。

相关链接：食品中蛋白质的测定—凯氏定氮法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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