1 范围

本标准规定了保健食品中a-亚麻酸、二十碳五烯酸(简称EPA,下同)、二十二碳五烯酸(简称 DPA,下同)和二十二碳六烯酸(简称DHA,下同)的气相色谱测定方法。

本标准适用于保健品食品中a-亚麻酸、EPA、DPA、DHA的测定，不适用于以脂肪酸乙酯为有效 成分的保健食品中a-亚麻酸、EPA、DPA、DHA的测定。

2 原理

试样经酸水解后提取脂肪，其中a-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二碳六烯酸(DHA)经酯交换生成甲酯后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 氢氧化钾(KOH)。

3.1.2 盐酸(HC1)。

3.1.3 无水乙醚(C₂H₅OC₂H₅)。

3.1.4 乙醇(CH₃CH₂OH):体积分数≥95%。

3.1.5 石油醚：沸程 30℃～60℃。

3.1.6 正己烷(CH₃(CH₂)₄CH₃)：色谱纯。

3.1.7 甲醇(CH₃OH)：色谱纯。

3.1.8 无水硫酸钠(Na₂SO₄)。

3.2 试剂配制

氢氧化钾甲醇溶液(0.5mol/L)：称取2.8g氢氧化钾，用甲醇溶解并定容至100mL,混匀。

3.3 标准品

3.3.1 a-亚麻酸甲酯(C₁₉H₃₂O₂)：纯度≥99.0%。

3.3.2 EPA 甲酯(C₂₁H₃₂O₂)：纯度≥98.5%。

3.3.3 DPA 甲酯(C₂₃H₃₆O₂)：纯度≥98.0%。

3.3.4 DHA 甲酯(C₂₃H₃₄O₂)：纯度≥98.5%。

3.4 标准溶液的配制

3.4.1 单个脂肪酸甲酯标准储备液(4.0 mg/mL)：称取100.0 mg a-亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯、 DHA甲酯标准物质于25.0 mL容量瓶中，分别用正己烷溶解并定容至刻度，摇匀。此溶液应贮存于-18℃冰箱中。

3.4.2 脂肪酸甲酯混合标准中间液(1.0 mg/mL)：分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液2.50mL于10.0mL 容量瓶中，摇匀，亦为标准曲线最高浓度，临用时配制。

3.4.3 脂肪酸甲酯标准工作液：分别吸取脂肪酸甲酯中间液0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL于10.0mL容量瓶中，用正己烷定容，此浓度即为0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL的标准工作液，临用时配制。

4 仪器与设备

4.1 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器(FID)。

4.2 天平：感量为1 mg和0.1 mg。

4.3 旋转蒸发仪。

4.4 离心机：转速≥4000r/min。

4.5 涡旋混合器。

4.6 恒温水浴锅。

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 试样处理

5.1.1.1 固体试样

称取已粉碎混合均匀的待测试样0.5g～2g(精确到0.001g)(含待测组分5mg/g～10mg/g)加入50mL比色管中，加8mL水，混匀后再加10mL盐酸。将比色管放入70℃～80℃水浴中，每隔5min～10min以涡旋混合器混合一次，至试样水解完全为止，需40min～50min。取出比色管，加入10mL乙醇，混合。冷却至室温后将混合物移入100mL具塞量筒中，以25mL无水乙醚分次洗比色管，一并倒入量筒中。密塞振摇1min。加入25mL石油醚，密塞振摇1min,静置30min,分层，将吸出的有机层过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中。再加入25mL无水乙醚密塞振摇1min,25mL石油醚，密塞振摇1min,静置、分层，将吸出的有机层经过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中，按“再加入25mL无水乙醚……,静置、分层、过无水硫酸钠”重复操作一次，将全部提取液用旋转蒸发仪于45℃减压浓缩近干。用正己烷少量多次溶解浓缩物，转移至25mL容量瓶并定容，摇匀。按5.1.2步骤甲酯化处理。

5.1.1.2 油类制品

称取混合均匀的油类制品0.2g～1g(精确到0.001g)(含待测组分10mg/g～20mg/g。)至25mL容量瓶中，加入5mL正己烷轻摇溶解，并用正己烷定容至刻度，摇匀。

5.1.2 甲酯化

吸取待测液(5.1.1.1,5.1.1.2)2.0mL至10mL具塞刻度试管中，加入2.0mL氢氧化钾甲醇溶液,立即移至涡旋混合器上振荡混合5min,静置5min,加入6mL蒸镏水，上下振摇0.5min,静置分层后，吸取下层液体，弃去后再反复用少量蒸镏水进行洗涤，并用吸管弃去水层，直至洗至中性(若有机相有乳化现象，以4000r/min离心10min),吸取正己烷层待上机测试用。

注：如使用塑料离心管或塑料刻度试管进行试样处理须同步进行空白对照试验。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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