6 试料的制备与保存

6.1 试料的制备

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合，并使均质。

—取均质后的供试样品，作为供试试料。

—取均质后的空白样品，作为空白试料。

—取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2 试料的保存

-20℃以下保存。

7测定步骤

7.1 提取

取试料(10±0.05)g,于50mL离心管中，加氘代氯霉素内标工作液250uL，再加乙酸乙酯20mL,振荡15min,6000r/min离心10min,取乙酸乙酯层液于鸡心瓶中。再加乙酸乙酯20mL复提取一次,合并两次提取液于鸡心瓶中，于45℃水浴旋转蒸发至干。用4%氯化钠溶液5mL溶解残留物，加正己烷5mL振荡混合1min,静置分层，弃正己烷液。再加正己烷5mL,重复提取一次。取下层液备用。

7.2 净化

C₁₈柱依次用甲醇5mL和水5mL活化，取备用液过柱，控制流速1滴/3～4s,用水5mL淋洗，抽干，用甲醇5mL洗脱，收集洗脱液，于50℃氮气吹干。用50%乙腈1.0mL溶解残余物，涡漩混匀,滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3 标准曲线的制备

精密量取100ug/L氯霉素标准工作溶液和20ug/L氘代氯霉素内标工作溶液适量，用流动相稀释，配制成氯霉素浓度为0.10、0.25、0.50、1.0、2.0、5.0ug/L,氘代氯霉素浓度为5ug/L的系列标准溶液,供液相色谱-串联质谱仪测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.4 测定

7.4.1 液相色谱条件

色谱柱：C₁₈(150mm×2.1mm,粒径5μm),或相当者；

柱温：30℃；

流速：0.2mL/min；

进样量：20uL；

运行时间：8min；

流动相：乙腈+水(50+50,v/v)。

7.4.2 质谱条件

电离模式：ESI；

扫描方式：负离子扫描；

检测方式：多反应检测；

电离电压：2.8kV；

源温：120℃；

雾化温度：350℃;

锥孔气流速：50L/h;

雾化气流速：450L/h；

数据采集窗口：8min；

驻留时间：0.3s。

定性、定量离子及对应的锥孔电压和碰撞电压见表1

表1 氯霉素定性、定量离子对和锥孔电压及碰撞电压

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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