7 测定步骤

7.1 提取

称取试料(2.0±0.02)g,于50mL离心管中，加乙腈10mL,超声5min,4000r/min离心12min,取上清液，于50mL鸡心瓶中。残渣中加乙腈10mL,重复提取一次，合并两次上清液，加正丙醇3mL,60℃旋转蒸近干。加乙腈0.5mL、正己烷1mL,涡漩3min,溶解，移至10mL的具塞离心管中。用乙腈0.5mL和正己烷1mL重复涡漩溶解一次。合并两次溶液至10mL的具塞离心管中，加入正己烷2mL,漩涡混合3min,4000r/min离心5min,弃上层正己烷液。再加正己烷2mL,重复提取一次，4000r/min离心5min,取下层液，备用。

7.2 净化

C₁₈柱用乙腈10mL活化，取备用液过柱，自然流干，收集滤液。用洗脱液4mL洗脱，收集洗脱液,合并滤液和洗脱液，于60℃旋转蒸发近干，用流动相2.0mL溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

7.3 标准曲线的制备

精密量取100ug/mL 4,4'-二硝基均二苯脲标准工作液适量，用流动相稀释，配制成浓度为31.25、62.5、125、250、500、1000、2000、4000和8000ug/L的系列标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.4 测定

7.4.1 色谱条件色谱柱：C₁₈(250mm×4.6mm,粒径5/um),或相当者；

流动相：乙腈+水(58+42,v/v);

流速：1.0mL/min；

检测器：紫外检测器；

波长：340nm；

柱温：30℃；进样量：20uL。

7.4.2 测定法

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中4,4'-二硝基均二苯脲响应值应在仪器检测的线性范围之内。

7.5 空白实验

除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8 结果的计算与表达

试料中4,4'-二硝基均二苯脲的残留量(ug/kg)：按下式计算

式中：

X—试试料中4,4'-二硝基均二苯脲的残留量，ug/kg；

A—试样溶液中4,4'-二硝基均二苯脲的峰面积；

As—标准溶液中4,4'-二硝基均二苯脲的峰面积；

Cs—标准溶液中4,4'-二硝基均二苯脲的浓度，ug/L;

V—溶解残余物的流动相体积，mL;

m—试试料质量，g。

注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后三位。

9 检测方法的灵敏度、准确度、精密度

9.1 灵敏度

本方法的检测限为20ug/kg,定量限为100ug/kg。

9.2 准确度

本方法在100～400ug/kg添加浓度水平上的回收率为70%～110%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤20%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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