7 测定步骤

7.1 提取

称取试料(2±0.05)g,于50mL离心管中，加磷酸100uL,乙腈4mL,涡漩混匀，中速振荡5min,10000r/min离心10min,取上清液于另一离心管中，加正己烷5mL,涡旋1min,静置，取下层清液于25mL鸡心瓶中。残渣中加乙腈4mL,重复提取一次，上清液经同一份正己烷分配，合并两次提取液，于50℃旋转蒸发至仅剩余不易蒸干的黄色油滴。用流动相1.0mL溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱法测定。

7.2 标准曲线制备

精密量取喹诺酮类药物混合标准工作液适量，用流动相稀释，配制成浓度环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星为5、10、50、100、300和500ug/L,达氟沙星浓度为1、2、10、20、60和100ug/L的系列标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.3 测定

7.3.1 色谱条件色谱柱：C₁₈(250mm×4.6mm,粒径5um),或相当者；流动相：0.05mol/L磷酸溶液-三乙胺+乙腈(90+10,v/v),滤膜过滤；

流速：1.8mL/min；

检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；

柱温：30℃；

进样量：20uL。

7.3.2 测定法

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星响应值应在仪器检测的线性范围之内。

7.4 空白试验

除不加试料外，釆用完全相同的测定步骤进行平行操作。

8 结果计算和表述

试料中喹诺酮类药物残留量(ug/kg),按下式计算:

式中：

X―供试试料中相应的喹诺酮类药物残留量，ug/kg；

C—试样溶液中相应的喹诺酮类药物浓度，ng/mL；

V—溶解残渣所用流动相体积，mL；

m—供试试料质量，g。

注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9 检测方法灵度、准确度、精密度

9.1灵敏度

本方法环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星的检测限为5ug/kg,定量限为10ug/kg；达氟沙星的检测限为1ug/kg,定量限为2ug/kg。

9.2 准确度

本方法在10～100ug/kg添加浓度水平上的回收率为60%～100%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤20%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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