6 试料的制备与保存

6.1 试料的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

—取均质后的供试样品，作为供试试料。

—取均质后的空白样品，作为空白试料。

—取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2 样品的保存

-20℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 基质匹配标准曲线的制备

精密量取10ug/mL的常山酮标准贮备液适量，用甲醇溶解并稀释,配制成浓度为50、100、300、500和1000ug/L的系列标准溶液，各取1.0mL,分别加至经提取、净化步骤处理的空白试料洗脱液中，于38℃水浴下氮气吹干，用流动相1.0mL溶解残余物，供高效液相色谱法测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.2 提取

称取试料(4±0.04)g,于100mL离心管中，加胰蛋白酶50mg,加水2mL(肝脏组织)或水10mL(肌肉组织)，涡动1min,用10%碳酸钠溶液调PH至8.0,于40℃水浴下酶解3h。取出，放至室温，加10%碳酸钠溶液2mL,涡动1min,再加乙酸乙酯20mL,涡动10s,在冰水浴中静置3min,立即2000r/min离心2min,将上清液转入100mL分液漏斗中。下层液用乙酸乙酯20mL重复提取一次，合并两次上清液于同一分液漏斗中，加0.125mol/L乙酸铵溶液10mL,振摇1min,静置2min,收集下层水相。再加0.125mol/L乙酸铵溶液10mL,重复萃取一次，合并两次水相，转至鸡心瓶中，于38℃旋转蒸发，除尽残余的乙酸乙酯，备用。

7.3 净化

HLB柱依次用甲醇3mL、水3mL和0.125mol/L乙酸铵3mL活化，取备用液过柱，控制流速1mL/min,用甲苯2mL洗涤，挤干，用甲醇3mL洗脱，收集洗脱液，于38℃氮气吹干，用流动相1.0mL溶解残余物，混匀，滤膜过滤，供高效液相色谱法测定。

7.4 测定

7.4.1 色谱条件

色谱柱：C₁₈(150mm×3.9mm,粒径4um),或相当者；

流动相：乙腈-0.25mol/L乙酸铵缓冲液-水；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：243nm；

进样体积：25uL。

7.4.2 测定法

取试样溶液和相应的对照溶液，做单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。对照溶液及试样溶液中常山酮响应值应在仪器检测的线性范围之内。

7.5 空白试验

除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8 结果计算和表述

试料中常山酮的残留量(ug/kg)：按下式计算

式中：

X—供试试料中常山酮的残留量，ug/kg;

C—试样溶液中常山酮浓度，ug/mL;

V—溶解残留物所用流动相体积，mL；

m—供试试料质量，g。

注：计算结果需扣除空白试料值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9 检测方法灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

本方法检测限为25ug/kg；定量限为50ug/kg。

9.2 准确度

本方法在50～500ug/kg添加浓度水平上回收率为80%～110%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤20%。

相关链接：动物性食品中常山酮残留量的测定（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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