7 测定步骤

7.1 标准曲线的制备

精密量取1ug/mL阿维菌素和伊维菌素混合标准工作液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为0.1、0.2、0.5、1和2ug/mL的系列标准溶液，各取0.1mL于5mL离心管中，于45～55℃水浴氮气吹干，按衍生化步骤处理。供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为磺坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.2 提取

称取试料(5±0.05)g,于50mL聚丙烯离心管中，加乙15mL,旋涡混合1min,超声30min,4000r/min离心5min,取上清液于另一50mL聚丙烯离心管中。残渣中加入乙腈10mL,重复提取一次，合并两次提取液。在提取液中加正己烷10mL,充分涡旋混合1min,4000r/min离心5min,弃上层正己烷层。提取液中再加正己烷10mL,重复提取一次，弃正己烷层，备用。

7.3 净化

取备用液，依次过用乙腈10mL活化的无水硫酸钠柱和碱性氧化铝固相萃取柱，收集滤液。待滤液流至将尽，用乙腈10mL冲洗离心管，转至无水硫酸钠柱和碱性氧化铝固相萃取柱，吹干，合并滤液于茄形瓶中，于40~50℃旋转蒸发至干，用乙腈3mL分2次溶解残余物，并转至5mL具塞玻璃离心管中，45～55℃水浴氮气吹干。

7.4 衍生化

于上述5mL离心管中加衍生化试剂A100uL,盖紧塞子，旋涡混合30s,再加衍生化试剂B150μL,盖紧塞子，旋涡混合30s,密封避光，室温下衍生15min,加甲醇750uL,旋涡混合30s,过滤，供高效液相色谱测定。

7.5 测定

7.5.1色谱条件色谱柱：C₁₈(250mm×4.6mm,粒径5um),或相当者；

流速：1.5mL/min；

进样量：20uL；

柱温：35℃；

检测器：激发波长365nm,发射波长475nm。

洗脱梯度见表1：

表1洗脱梯度表

7.5.2 测定法

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中阿维菌素和伊维菌素响应值应在仪器检测的线性范围之内。

7.6 空白实验

除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8 结果计算

试料中阿维菌素或伊维菌素的残留量(ug/kg)：按下式计算

式中：

X—供试试料中相应的阿维菌素或伊维菌素残留量，ug/kg；

C—试样溶液中相应的阿维菌素或伊维菌素的浓度，ng/mL；

V—试样溶液总体积，mL；

m—供试试料质量，g。

注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9 方法的灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

本方法检测限为2ug/kg,定量限为4ug/kg。

9.2 准确度

本方法在4～20ug/kg添加浓度水平上的回收率为70%～120%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤15%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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