5)胶体金免疫层析法(immune colloidal gold technique, GICT)

胶体金是由氯金酸在还原剂如柠檬酸三钠、白磷、枸橼酸钠、鞣酸等的作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，在静电作用下形成的一种稳定的胶体状态。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团牢固结合。由于这种结合是静电结合，所以胶体金能稳定、迅速地吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显改变，不影响蛋白质的生物学特性。将CAPs单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上，并将人工合成的CAPs抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线)，其与待测样品中CAPs竞争结合胶体金标记的CAPs单克隆抗体，并以颜色直观显示检测的定性结果。该方法检测浓度可达到ng/mL水平，成为CAP残留现场监控的有效筛检手段。

李余动等为建立用于快速检测样品中CAP残留含量的GICA试纸条，采用免疫竞争法，将抗CAP单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上，并将人工合成的CAP抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线，其与待测样品中CAP竞争结合胶体金标记的CAP单克隆抗体，并能以颜色直观显示检测的定性结果。检测虾肉等组织试样时，灵敏度最低值可达到1ng/mL，只需5～10min，与类似物无交叉反应。王自良等以BSA-CAP-HS免疫Balb/C小鼠，用细胞融合技术筛选抗CAP单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞，体内诱生腹水法制备CAP mAb，并鉴定其免疫学特性;依据GICA原理，以CAP mAb为金标抗体，研制CAP残留快速检测金标试纸，并对其性能进行测定。结果表明，该金标试纸的标准曲线呈典型的S形，符合拟合曲线，目测LOD为0.5μg/L，其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当，符合率为100%。肖治理等为研究应用检测CAP的GICA技术，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗CAP单克隆抗体，将CAP偶联抗原和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜作为检测线和质控线，研制CAP胶体金快速检测试纸条。通过优化试验，确定最佳标记pH为8.5、最佳标记量为36μg/mL、最佳抗原包被浓度和最佳二抗包被浓度分别为0.5mg/mL、1.0mg/mL。经过试验制成的试纸条LOD为2ng/mL，检测时间5～8min，肉眼即可判断结果。桑丽雅等应用GICA技术，研制一种水产品中CAP免疫胶体金快速检测试剂条。将制备的金溶液以最适蛋白标记量标记抗CAP单克隆抗体制成金标抗体，将羊抗鼠IgG、CAP-BSA和金标抗体三者经过反复调试优化，以适宜质量浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和胶体金结合垫上。NC膜经37℃恒温干燥32h或25℃恒温干燥7天后，和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条。经实验，该试剂板对水产品中CAP的LOD为0.3ug/kg，假阳性率4%，假阴性率为2%，常温保质期在6个月以上。

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文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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