(7)免疫分析法(immuneanalysis，IA)

免疫分析是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术，适用于复杂基质中痕量组分的分离或检测，于20世纪80年代逐渐应用于药物残留分析。MALs和林可胺类药物残留的免疫分析中主要采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、荧光免疫分析法(fluoroimmunoassay，FIA)以及免疫层析检测方法(immunochromatographic assay，ICA)。

Silverlight等报道了替米考星的ELISA测定法。选择与替米考星结构相关的desmycocin(tylosinB DES)合成模拟替米考星的半抗原和人工抗原，载体为卵清蛋白(OVA)。直接竞争ELISA结果表明，DES抗体能识别替米考星和泰乐菌素，交叉反应率分别为100%和96%。利用DES抗体建立的ELISA检测肺组织中的替米考星，LOD为0.01mg/kg。由于该ELISA方法在抗原制备和抗体获取上存在困难，在MALs残留分析中的使用还很少见。何方洋等通过对林可霉素分子结构进行改造，合成了半抗原及人工抗原免疫动物，制备了林可霉素的鼠单克隆抗体，利用获得的单抗建立了ELISA方法。该方法的灵敏度为0.2μg/L；对林可霉素的交叉反应率为100%，对克林霉素、红霉素、泰乐菌素、链霉素、卡那霉素的交叉反应率均小于1%；在20μg/kg和40μg/kg添加水平的鸡肉样品中回收率范围为83.5%～96.5%，CV小于15%。

Ye等建立了一种间接竞争FIA法来检测牛奶中的磺胺二甲嘧啶、泰乐菌素和链霉素残留量。牛血清蛋白(BSA)连接的半抗原固定于载玻片上，此系统包括四块载玻片，其中包括密封忌水的96孔板，样品的处理类似于ELISA方法，针对三种药物的单克隆抗体可满足其同时检测。二抗物质带有一个Cy5分子，可以产生荧光，其信号强弱可被扫描监测。该方法的LOD分别为3.26ng/mL(磺胺二甲嘧啶)、2.01ng/mL(链霉素)、6.37ng/mL(泰乐菌素)，远远低于规定的泰乐菌素的MRL。

Le等开发了一种ICA方法，应用在肌肉、肝脏、鱼和鸡蛋中残留泰乐菌素和替米考星的检测。该方法基于竞争原理，通过扫描最佳纳米金标记单克隆抗体量，来有效改善其灵敏度。用新型纳米金粒子标记，利用ICA法，10分钟便可完成测定。对于泰乐菌素和替米考星，视觉LOD值分别为10ng/g和20ng/g；泰乐菌素和替米考星基质标准曲线范围为0.1～100ng/mL；泰乐菌素和替米考星的IC₅₀值为分别2.9ng/mL和4.1ng/mL；回收率范围在71.5%～103.2%之间；添加浓度为10～100ng/g时，其CV小于14.1%。该ICA的分析结果与ELISA和HPLC的测定结果一致。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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