原生质体的活力强弱是原生质体培养成功与否的关键因素之一。了解自己的实验材料、分离方法以及酶液体系所获的原生质体的活力，对修正酶液组合和下一步的培养至关重要。

因此，在前期的实验中必须测定原生质体的活力。原生质体活力测定的方法主要有以下几种。

一、荧光素二乙酸法

荧光素二乙酸盐(fluorosetindiacetate，FDA)，本身无荧光，无极性，能自由进出完整的、具有活力的原生质体膜。一旦进入原生质体，FDA能被原生质体的酯酶分解而成为具有荧光的极性物质。极性物质不能再进出质膜，积累在原生质体内。无活力的原生质体不能产生荧光。在荧光显微镜下，能够分辨出有活力的原生质体，并计算出存活百分率。FDA法方便可靠，是目前最常用的方法。

(1)FDA母液配制FDA不溶于水，能溶于丙酮。把1mgFDA溶于1mL丙酮中作为母液，4℃冷藏贮存，贮期不宜过长。使用时取0．1mL母液加在新配制的10mL 0．5～0．7mol／L甘露醇溶液中，最终浓度为0．01％。

(2)染色观察取1滴0．01％的FDA液与1滴原生质体悬浮液在载片上混匀，25℃室温染色5～10min。用荧光显微镜观察，激发光波长330～500nm，活的原生质体产生黄绿色荧光。用计数器计算存活百分率。

二、酚藏花红染色法

酚藏花红(phenosafranine)是一种碱性染料，溶于水显红色并带黄色荧光，其最大激发和发射波长分别为527nm和588nm。酚藏花红能被活的原生质体吸收而呈红色，无活性的原生质体无吸收能力而无色。

(1)母液配制称取适量的酚藏花红溶于0．5～0．7mol／L的甘露醇溶液内，配成0.01％浓度的母液。

(2)染色观察取一滴新鲜母液与原生质体悬浮液等量混匀，室温下染色5～10min，荧光显微镜下镜检。

三、形态观察法

一般凭形态特征即可识别原生质体的活力。如果颜色鲜艳、形态完整、富含细胞质，则有活力。也可采用渗透压变化法，把原生质体放入高渗或低渗溶液中，观察张缩情况来判断其活力。如果体积能随溶液的渗透压变化而改变，即为活的原生质体。

四、其他方法

胞质环流法，即在显微镜下具有环流者为有旺盛代谢活力的原生质体。但是该法对细胞周围带有大量叶绿素的叶肉细胞原生质体并不适用。另外，也可以氧的摄入量为指标，评价原生质体的活力，氧的摄入量可用能指示呼吸代谢强度的氧电极进行测定，呼吸强度高的是具有代谢活力的原生质体。