一、吸光光度分析法

吸光光度分析法一般只适应于微量组分的测定，当待测组分含量高时，吸光度超出了准确测定的读数范围，准确度就会降低，采用示差光度法可以弥补。示差光度法和普通吸光光度法的主要区别是参比溶液不同，它采用比待测溶液浓度稍低的标准溶液作参比溶液，测量待测试液的吸光度。根据朗伯一比耳定律，用A对c作图时应为直线关系，但如果单色光不纯、介质不均匀（如浓液中有胶体粒子存在，会引起光的散射）或因化学变化所致（如有色质点的离解，缔合或形成新的配合物，会改变有色物质的浓度）都会引起偏离朗伯一比耳定律。

二、铵的测定

微量铵的测定常采用标准系列法。NH4+与奈氏试剂（K2HgI4的强碱性溶液）作用，生成棕黄色的胶体溶液，反应为：

NH4+＋2[HgI4]2-＋4OH-=[Hg2ONH2]I＋7I-＋3H2O

溶液颜色深浅与NH4+的浓度成正比。

根据上述原理，测定时先制备标准色阶，同时在相同条件下使NH4+的试样溶液显色，然后在比色管中比色测定。

在进行测定时，所用的蒸馏水应加入碱和高锰酸钾进行重蒸馏，以除去蒸馏水中的微量按。如果有Ca2+、Mg2+等存在时，对测定有干扰，可加入酒石酸盐进行掩蔽。另外，还应加入阿拉伯胶保护胶体，使胶体溶液稳定。

三、铁的测定

微量铁的测定根据所用显色剂的不同，有邻二氮菲法、磺基水杨酸法、硫氰酸盐法等。目前最常用的是邻二氮菲法。此法准确度高，重现性好，Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橘红色配合物。

生成配合物的摩尔吸光系数ε为1.1×104。在pH=2~9范围内都能显色，且颜色深度与溶液酸度无关，为了减小其他离子的影响，通常显色反应在微酸性(pH=5)溶液中进行。Fe3+也能与邻二氮菲反应生成淡蓝色配合物，若铁以Fe3+形式存在，则可预先用盐酸羟胺（或对苯二酚）将其还原，其反应为：

2Fe³⁺ +2NH2OH·HCl=2Fe²⁺+N₂↑＋2H₂O+4H⁺ +2Cl-

利用上述显色反应在完全相同的条件下使Fe3+的标准溶液和待测溶液显色，然后用分光光度计在508nm波长下测其吸光度，作出工作曲线，求出待测试液中铁的含量。该法选择性很高，相当于铁含量40倍的Sn2+、A13+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Si2O2-3；20倍的Cr3+、Mn2+、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+均不干扰测定。

四、磷的测定

利用吸光光度分析法，使用721型或722型分光光度计可以测定样品中磷含量，如植株中的全磷、土壤速效磷、血清中的无机磷、饲料中的总磷量的测定，食品加工中品质改良剂——焦磷酸盐、总磷酸盐、游离磷酸盐和结合磷的测定也可以采用吸光光度分析法。

微量磷的测定一般采用钼蓝法。在酸性溶液中，磷酸盐与钼酸铵作用生成黄色磷钼酸，其反应为：

PO₄3-+12MoO₄^2- ＋27H⁺↔H₇[P(Mo₂O₇)₆］（黄）+10H₂O

在一定酸度下，加入适量的还原剂将磷钼酸还原为磷钼蓝，使溶液呈深蓝色。

蓝色的深浅与磷的含量成正比。

磷钼蓝法所用的还原剂为氯化亚锡或抗坏血酸。用SnCl2作还原剂，反应灵敏度高，显色快，但蓝色显色时间短，对酸度和钼酸铵的浓度要求比较严格，干扰离子较多。用抗坏血酸作还原剂，反应灵敏度高，稳定时间长，反应要求的酸度范围宽（c(H+）为0.48~1.44mol•L-1)，Fe3+，AsO3-4、Si2O₃2-干扰较小，但显色速率慢，需要在沸水浴中加热。实际测定时，也常用抗坏血酸氯化亚锡分光光度法，即在加入氯化亚锡前，先加入少量抗坏血酸，这样不但可以消除大量Fe3+的干扰，增加钼蓝的稳定性，而且能使显色在室温下进行，简化操作手续。磷的含量为0.05~2.0mg•kg-1时，符合朗伯一比耳定律，生成的钼蓝在650nm波长下有最大吸收，故可在此波长下测定其吸光度。