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在已经发表有关NFs残留检测方法的文献中,早期的报道大多数是检测原药。然而,由于NFs对光敏感,且具有代谢快速的特点,在动物体内的半衰期不过数小时,在动物组织中通常不太可能检出原药残留。因此,残留检测的标识物已经变为它们的代谢产物。目前,国内外报道的NFs代谢物残留检测方法主要有酶联免疫法(ELISA)、液相色谱法(LC)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等。
09-2021
LC-MS串联技术拥有高效的分离能力,出色的检测灵敏度和较强的克服杂质干扰能力,是目前测定NFs代谢物最主要的技术手段,而LC-MS/MS则是最常用的方法。
免疫学分析方法是基于抗原-抗体特异性反应建立起来的测定方法,具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度较高、特异性强等诸多优点,缺点是假阳性率较高。
在仪器的最佳工作条件下,用基质标准工作溶液分别进样,以各标准溶液中被测组分峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标,以各标准溶液被测组分浓度与内标物浓度的比值为横坐标,绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。
从样品中提取大环内酯类药物的主要提取溶液有0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液、0.1mol/L碳酸氢钠缓冲溶液、0.1molL Tris缓冲溶液,对此进行了对比实验。
配制浓度分别为2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的混合标准溶液,在选定的条件下进行测定,进样量为20μL,用峰高对标准溶液中各被测组分的浓度作图。
采用本方法对有代表性的荞麦蜜、洋槐蜜、荆条蜜、油菜蜜、紫云英蜜,在2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、50μg/kg四个添加水平,对林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素进行添加回收率实验。
蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的残留用Tris提取液提取,提取液经OasisHLB固相萃取柱净化,甲醇洗脱,洗脱液浓缩定容后,供液相色谱-串联质谱法测定。外标法定量。
在仪器最佳工作条件下,以基质标准工作溶液浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线。用基质标准工作溶液的工作曲线对样品进行定量,应使样品溶液中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的响应值在仪器测定的线性范围内。
用空白基质溶液配制不同浓度的混合标准溶液,在选定的条件下进行测定,进样量为20μL,用峰高对标准溶液中各被测组分的浓度作图。林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素和交沙霉素的绝对量在0.04~1.00ng范围内均呈线性关系。
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