6.2提取

称取试样5 g(精确至0. 01 g)，加入250 mL三角瓶中，加入25 mL甲醇和50%的氢氧化钾溶液(4. 8) 10 mL,在60°C水浴中浸提30 min,不时振摇。然后再超声振荡10 min,转移至100 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL正己烷，涡旋混匀5 min,4 000 r/min离心10 min分层,取上层正己烷相经无水硫酸钠柱滤入100 mL圆底烧瓶中，再用15 mL正己烷按上述操作重复提取水相一次。将提取液在50°C水浴中旋转蒸发,当圆底烧瓶中剩下约1 mL液体时，取下圆底烧瓶，将液体移入试管中，再加入2 mL正己烷清洗，合并到试管中,重复清洗一次，收集的液体留过柱用。

6.3净化

先使用3 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化固相萃取柱(4. 7),流速约为2 mL/min。将提取液用10 mL 正己烷洗入柱子中，再用8 mL的正己烷-二氯甲烷溶液(4. 9)洗脱，用50 mL圆底烧瓶收集洗脱液。将洗脱液在50°C水浴中旋转蒸发浓缩，待瓶中剩下约1 mL时,取下圆底烧瓶，将液体移入试管中，再加入 2mL正己烷清洗圆底烧瓶2次,合并至试管中，氮气吹干，准确加入1.00 mL乙腈，超声溶解后，用 0. 45 μm的微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。

6.4试样测定

6.4. 1色谱条件

6.4. 1.1色谱柱:反相C¹⁸ ,250 mmX4.6 mm,粒度5μm；或与之相当的色谱柱。

6.4.1.2流动相：乙腈+水(75 + 25)。

6. 4.1.3 流速:1. 0 mL/ min。

6.4. 1.4 柱温：35°C。

6.4.1.5检测器波长:激发波长297 nm,发射波长405 nm。

6.4. 1.6进样量：20μL。

6.4. 2色谱分析:分别取标准工作液(4.12)和试样提取液于液相色谱仪中,按上述色谱条件进行色谱分 析,记录分析结果，响应值均应在仪器检测的线性范围之内，根据标准品的保留时间定性,外标法定量。标准品色谱图参见附录A。

6. 5空白试验

不加试样，在相同试验条件下,与试样测定的同批进行空白试验。

7计算

试样中苯并(a)芘的含量按式(1)计算。计算结果需扣除空白值。结果保留3位有效数字。

式中：

X——试样中苯并(a)芘的含量，单位为微克每千克(μg/ kg)；

C——试样中苯并(a)芘的含量，单位为微克每毫升(μg/ mL);

m——试样质量，单位为克(g);

V—试样定容的体积，单位为毫升(mL)。

8方法灵敏度、准确度和精密度

8. 1灵敏度

本方法最低检出限为0. 1 μg/kg,最低定量限为0. 5μg/kg。

8.2准确度

本方法添加浓度为0. 5 μg/kg〜40μg/kg时，回收率为75%〜110%。

8.3精密度

本方法批内和批间的相对标准偏差＜15 %。

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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