在试验开始前，需先确定待测药物适用剂量。与动物试验一样，先宜测出半效应量（medianlethaldose,LDso)。计算方法有两种方法，一种是粗略估算法，另外是借用药物的LD50（半致死量）进行精确计算。

粗略估计法：根据药物的作用，选择合适的指标确定药物的有效剂量。例如检测抗癌药物杀细胞活性，如果其已在临床应用或做过动物试验，可按已用药量推算。在无据可依的情况下，只有按试验者经验设计浓度梯度，如1μg/ml、3μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml。然后分五组培养细胞，每组两瓶。分别向五组培养细胞中加入五个剂量的药物，作用一定时间后，用台盼蓝染色法测试死活比数（存活的细胞可以排斥许多染料，如台盼蓝，细胞不着色，而死亡的细胞和严重受损细胞由于细胞膜的通透性改变，染料可通过细胞膜而被着色）。将所得数值进行直线回归，取50％死亡细胞时的浓度做为粗LD50。亦可用MTT的方法，设立一个对照组，不加入药物，以此为100％的存活，取OD570的值下降到50％的药物浓度。这种方法在％板上即可完成，方便、简单，比较准确。比较适用于贴壁细胞，如果是悬浮细胞，在操作过程中需要用到96孔板离心机。

计算LD50一些常见的方法有：寇氏法（Karber'smethod)、改良寇氏法和何尔恩法（Horn'smethod)等，这些方法比较准确。在计算过程中有些复杂的运算，为了解决这个问题，一些研究机构开发出计算机软件，使得计算更准确和快速，如Bliss法。下面的计算公式是改良寇氏法：

LogID50=Xm-i(ΣP-0.5）

i=Log（最大剂量／相邻剂量）

ΣP＝各组阳性反应率之和

此法比较简单，准确性也较高，但要求最大阳性反应组的阳性率＞80%，而且最小反应阳性率不小于20%。

待LD50确切值获得后，取LD50/10作为主要测试剂量。