确定出待测药物的LD50后，取LD50/10为试验剂量。根据细胞的生长特性进行加药。如原代培养的细胞或收获的贴壁细胞（经胰酶消化过），一般要等到最少12小时以后，此时细胞对药物的敏感性恢复到非胰酶水平。一般的最适宜时间是在接种后约第48小时，此时细胞已进入指数生长期，加药后可再更换一次培养液，然后加入测试药，置温箱中培养。药物在瓶皿中与细胞接触时间，要依据药物的性质（如半衰期）和细胞的敏感性决定，在试验开始时，需进行预实验，做出药物的作用效应和时间关系的曲线，依此选择适当的作用时间。一般不应少于8小时，也可处理12-24小时或更长些，然后弃掉含有药物的营养液，用不完全培养液洗1一2次，再补充新的培养液继续培养。