加热可使菌体蛋白质变性、酶失活，从而达到灭菌的目的加热灭菌可分为干热灭菌和湿热灭菌两类。在相同温度下湿热灭菌比干热灭菌效果好，这是因为在湿热条件下湿热蒸汽穿透力强；菌体吸收水分，蛋白质易变性；热蒸汽与较低温度的物体表面接触可凝结为水并放出潜热，这种潜热能迅速提高灭菌物体的温度。

(1)干热灭菌法

①火焰灭菌法 直接利用火馅烧灼使微生物死亡．这种方法灭菌彻底、迅速，适用于一般金属器械（如镊子等）、接种环（针）、涂布用玻璃棒、试管口、三角瓶口的灭菌以及带有病原菌的一些物品或带有病原菌的动植物体作彻底灭菌废弃处理。

②热空气灭菌法 将空气加热到140-160℃，保持1-3h杀死所有的微生物，可利用电烘箱进行，常用于一些玻璃器皿（如培养皿和移液管）、金属及其他干燥耐热物品的灭菌。

(2)湿热灭菌法

①煮沸灭菌法：被灭菌的物品放入水中煮沸，温度接近100℃，保持15-20min，可杀死微生物营养体。若要杀死芽抱，则需煮沸很长时间，若在水中加入2%-5％石炭酸，则5-10min可杀死芽抱。加入1％碳酸氢钠，可提高沸点，促进芽孢的死亡。本方法适用于可以浸泡在水中的物品灭菌，许多医疗器械如手术刀、剪子、注射器等。

②间歇灭菌法：采用连续3次的常压蒸汽灭菌，以达到杀死微生物营养体和芽抱的目的。先将需灭菌的物品放在100℃的条件下维持30-60min，以杀死微生物的营养体。然后取出置30℃条件下培养1d，使芽抱萌发成营养体，次日再以同样方法处理，连续进行3次灭菌，可杀死所有营养体与芽抱。这种方法适用于不宜高压灭菌的物质，某些需要高压蒸汽灭菌的材料在缺少高压蒸汽灭菌设备时也可采用。

③巴氏消毒（也称巴氏灭菌）：它是巴斯德最先提出来的。一些食品在高温作用下会使其营养和色、香、味受到损害，因而不宜用较高的温度灭菌，可采用巴氏消毒法，即采用较低的温度处理，以达到消毒或防腐，延长保藏期的目的。消毒温度为62-63℃，时间为30min或71℃15min，以杀死材料中的病原菌和一部分微生物的营养体。

④高压蒸汽灭菌：使用密闭的高压蒸汽灭菌锅，通过加热使容器内的水受热产生水蒸气，由于容器密闭蒸汽不能外溢，因而使蒸汽压力不断增大，蒸汽温度也随之增高，因此可以提高杀菌力，并缩短灭菌时间。该方法是最为有效且广泛应用的灭菌方法，常用于培养基、无菌水以及耐高温的物品和不适宜干热灭菌的物品等，食品加工中也常用本法。实验室中对一般培养基和无菌水常采用121℃维持20min灭菌。如果培养基中含有不耐高温的成分，则应采112-115℃维持20min灭菌，对蒸汽不易穿透的物质如草炭、土壤等则应提高压力并延长灭菌时间。

下面以手提式高压蒸气灭菌锅为例说明其使用方法。

a．加水：将盖打开并把内筒拿出，然后向灭菌锅内加水，使水面达到内筒底座为止。

b．装人待灭菌物品：将内筒放人灭菌锅，然后把待灭菌物品装人内筒，不要太紧或太满，并留有间隙，以利蒸汽流通。盖好盖后，将螺旋旋紧，注意要同时对称地旋紧两边螺旋，否则盖子不易盖严，会造成漏气现象。

c．加热和排气：接通电源后即可打开排气阀，继续加热，待锅内水沸腾后有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内和灭菌物容器中冷空气完全排净。如果排气不彻底造成表压和温度不相符，降低灭菌效果。

d．升压保压力：排气完毕后关闭排气阀使锅内压力逐渐升高，待压力升高到0.1MPa时，维持20min即可达到灭菌要求。

e．降压与排气：维持时间达到要求后应停止加热，使其自然冷却，此时切勿急于打开排气阀，因为如果压力骤降，则会导致培养基剧烈沸腾而冲掉或污染棉塞，待压力降至接近零时，再打开排气阀。

f．出锅：排气完毕后即可松开盖上螺旋打开盖子，此时可不必急于取出灭菌物品，待15-20min后，借锅中余热将棉塞防潮纸烘干后，再将锅内灭菌物品取出。