二、维生素D的测定(高效液相色谱法)

1．原理

将样品皂化，由酯型转化为游离型，用高效液相色谱测定。

2．试剂及设备

(1)试剂乙醚(不含过氧化物)、乙醇、甲醇、无水Na₂SO₄、50% KOH溶液、焦性没食子酸。维生素D标准(Merck)液的配制：称取5.3mg标准品，用少量乙醇溶解后用甲醇定溶至50mL，即为106 ug/mL的标准液，再取1.0mL定容至25 mL，即为4.24ug/mL的高效液相色谱仪用的标准溶液。

(2)设备高效液相色谱仪具可调波长紫外检测器，直型K-D浓缩器，磁力加热搅拌器。

3．检测步骤

(1)皂化取5～10g样品，加1g焦性没食子酸50mL乙醇溶液，在磁力搅拌器下使样品均匀溶解后加入30mL 50% KOH溶液，在(50±2)℃搅拌回流40 mim。

(2)提取取下回流液，冲凉后用50、30、20、10mL乙醚萃取，合并乙醚层，用水洗至中性，过无水Na₂SO₄，在50℃下浓缩至约5 mL，取下后，用甲醇定容至10mL，待测定。

(3)色谱条件色谱柱：u-Bondapak C₁₈ 3.9mm×30cm；流动相：甲醇；流速：0.8mL/min；测定波长：265nm。

(4)样品测定吸取处理好的样品20 uL，注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析，同时进行标准溶液的分析，将样品的峰与标准溶液峰比较，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。

4．结果计算

式中S'—样品峰面积；

S—标准峰面积；

A—样品稀释总体积，mL ;

ρ—标准溶液浓度，ug/mL。

三、维生素E含量的测定(高效液相色谱法)

1．原理

样品皂化后，维生素E由酯型转化为游离型，用高效液相色谱测定，但有时为节省时间也可省去皂化，直接提取后进行测定。

2．试剂及设备

(1)试剂50% KOH溶液，无水乙醇、乙醚(无过氧化物)、2,6-二叔丁基对甲苯酚(BHT)、异辛烷、1,4-二噁烷。维生素E标准溶液：精确称量一定量的标准维生素E,溶于异辛烷中，使最终浓度为20ug/mL。

(2)设备植物捣碎机，旋转蒸发仪，磁力加热搅拌器，冷凝管，高效液相色谱仪(具可调波长紫外检测器)。

3．检测步骤

(1)样品处理取样品于植物捣碎机中捣碎，准确称取5～10g于三角瓶中，加20mL 50% KOH, 60mL无水乙醇，接上冷凝管，于磁力加热搅拌器上70℃回流30min，回流结束后，样品冷却至40℃左右后，用乙醚提取两次，用水洗至中性，经无水Na₂SO₄脱水后，提取液移入250mL容量瓶中，加入100 mg抗氧化剂BHT，待BHT溶解后，定容至刻度，混匀，吸取100 mL提取液于鸡心瓶中，在50℃水浴中旋转蒸发干燥，用2.0 mL异辛烷溶解，贮于瓶中。

(2)色谱条件色谱柱：Lichrosorb Si-60  250mm×4mm；流动相：含0.4% 1,4-二噁烷的异辛烷；流速：1.0～1.5 mL/min ;检测器：紫外280nm；进样量：20uL。

(3)结果计算根据标准维生素E的保留时间定性，根据样品的峰高或峰面积积分值定量。

4.注意事项

(1)若为蔬菜、水果等低脂肪样品，可不经过皂化，直接提取。

(2)若为植物油等样品，可稀释后过滤直接上机。

相关链接：维生素的测定（一）

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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