(一)测定原理

根据阿斯巴甜和阿力甜易溶于水、甲醇和乙醇等极性溶剂的特点，蔬菜及其制品、水果及其制品、食用菌和藻类、谷物及其制品、焙烤食品、膨化食品和果冻试样用甲醇水溶液在超声波振荡下提取；浓缩果汁、碳酸饮料、固体饮料类、餐桌调味料和除胶基糖果以外的其他糖果试样用水提取；乳制品、含乳饮料类和冷冻饮品试样用乙醇沉淀蛋白后用乙醇水溶液提取；胶基糖果用正己烷溶解胶基并用水提取；脂肪类乳化制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、坚果与籽类、水产及其制品、蛋制品用水提取，然后用正己烷除去脂类成分。各提取液在液相色谱C₁₈反相柱上进行分离，用高效液相法(GB 5009. 263-2016)测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

(二)试剂和仪器

1．试剂

①甲醇(CH₃OH)：色谱纯。

②乙醇(CH₃CH₂OH)：优级纯。

③阿斯巴甜、阿力甜标准品：纯度≥99%。

④阿斯巴甜、阿力甜标准储备液(0.5mg/mL)：各称取0.025g(精确至0.0001g)阿斯巴甜和阿力甜标准品，用水溶解并转移至50mL容量瓶中，定容至刻度，置于4℃左右冰箱保存，有效期为90d。

⑤阿斯巴甜、阿力甜混合标准工作液系列的制备：将阿斯巴甜和阿力甜标准储备液用水逐级稀释成浓度均分别为100、50、25、10.0、5.0ug/mL的标准使用溶液系列。置于4℃左右的冰箱保存，有效期为30d。

2.仪器及设备

液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器；超声波振荡器；离心机(4000r/min)。

(三)测定步骤

1．取样及样品处理

(1)碳酸饮料、浓缩果汁、固体饮料、餐桌调味料和除胶基糖果以外的其他糖果碳酸饮料称取约5g(精确到0.001g)试样于50mL烧杯中，在50℃水浴上除去二氧化碳，然后将试样全部转入25 mL容量瓶中备用。

浓缩果汁：直接称取约2g试样(精确到0.001g)于25 mL容量瓶中备用。

固体饮料、餐桌调味料或绞碎的糖果：称取约1g试样(精确到0.001g)于50mL烧杯中，加水10mL，超声波振荡提取20min，将提取液移入25 mL容量瓶中，烧杯中再加入10 mL水超声波振荡提取10min，提取并入同一容量瓶中备用。

上述容量瓶的液体用水定容，混匀，4000r/min离心5 min，上清液经0.45um水系滤膜过滤后用于色谱分析。

(2)乳制品、含乳饮料和冷冻饮品含有固态果肉的液态乳制品需要用食品加工机进行匀浆，对于干酪等固态乳制品，用食品加工机按试样与水的质量比1:4进行匀浆。

分别称取约5g(精确到0.001g)液态乳制品、含乳饮料、冷冻饮品、固态乳制品匀浆试样于50mL离心管，加入10mL乙醇，盖上盖子。对于含乳饮料和冷冻饮品试样，首先轻轻上下颠倒离心管5次(不能振摇)，对于乳制品，先将离心管涡旋混匀10s，然后静置1 min, 4000r/min离心5 min，上清液滤入25 mL容量瓶，沉淀用8 mL乙醇-水(2+1)洗涤，离心后上清液转移入同一个25 mL容量瓶，用乙醇-水(2+1)定容。经0.45 um有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

(3)果冻对于可吸果冻和透明果冻，用玻棒搅匀，含有水果果肉的果冻需要用食品加工机进行匀浆。称取约5g(精确到0.001g)制备均匀的果冻试样于50mL的比色管中，加入25mL 80％的甲醇水溶液，在70℃的水浴上加热10min，取出比色管，趁热将提取液转入50 mL容量瓶，再用15mL 80％的甲醇水溶液分两次清洗比色管，每次振摇约10s,清洗液并入同一容量瓶，冷却至室温，用80％的甲醇水溶液定容，混匀，4000r/min离心5 min,将上清液经0.45 um有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

(4)果蔬及其制品、食用菌和藻类有果核的首先需要去掉果核。对于较干较硬的试样，用食品加工机按试样与水的质量比为1:4进行匀浆，称取约5g(精确到0.001g)匀浆试样于25 mL离心管中，加入10mL 70％的甲醇水溶液，摇匀，超声10min, 4000r/min离心5 min，上清液转入25 mL容量瓶，再加8mL 50％的甲醇水溶液。重复操作一次，合并上清液，用50％的甲醇水溶液定容，经0.45 um有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

对于含糖多的、较黏的、较软的试样，用食品加工机按试样与水的质量比为1:2进行匀浆，称取约3g(精确到0.001g)匀浆试样于25 mL的离心管中；其他试样，用食品加工机按试样与水的质量比1:1进行匀浆，称取约2g(精确到0.001g)匀浆试样于25 mL的离心管中。然后向离心管加入14mL 60％的甲醇水溶液，摇匀，超声10min,4000r/min离心5min，上清液转入25 mL容量瓶，再加10mL 50％的甲醇水溶液。重复操作一次，合并上清液用50％的甲醇水溶液定容，经0.45 um有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

(5)谷物及其制品、焙烤食品和膨化食品用食品加工机进行均匀粉碎，称取1g(精确到0.001g)粉碎试样于50mL离心管中，加入12mL 50％甲醇水溶液，涡旋混匀，超声振荡提取10min, 4000r/min离心5min，上清液转移入25 mL容量瓶中，再加10mL 50％甲醇水溶液，涡旋混匀，超声振荡提取5min, 4000r/mim离心5min，合并上清液，用蒸馏水定容，经0.45um有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

(6)胶基糖果、脂肪类乳化制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、坚果与籽类、水产及其制品、蛋制品。

胶基糖果：用剪刀将胶基糖果剪成细条状，称取约3g(精确到0.001g)试样，转入100 mL的分液漏斗中，加水25 mL剧烈振摇约1 min，再加入30 mL正己烷，继续振摇直至试样全部溶解(约5min)，静置分层，将下层水相放入50mL容量瓶，然后加入10 mL水到分液漏斗，轻轻振摇约10s，静置分层，水相放入同一容量瓶中，再加水重复操作1次，最后用水定容至刻度，摇匀后过0.45um水系滤膜后用于色谱分析。

其他：用食品加工机按试样与水的质量比为1:4进行匀浆，称取约5g(精确到0.001g)匀浆试样于25 mL离心管中，加水10 mL超声振荡提取20min，静置1 min, 4000r/min离心5min，上清液转入100mL的分液漏斗中，离心管中再加入8mL水超声振荡提取10min，静置和离心后将上清液再次转入分液漏斗中，向分液漏斗加入15 mL正己烷，振摇30s，静置分层，将下层水相放入25 mL容量瓶，用水定容至刻度，摇匀后过0.45um水系滤膜后用于色谱分析。

2．色谱参考条件

①色谱柱：c_l8，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um；柱温：30℃；流动相：甲醇－水(40+60)或乙腈-水(20+80)；流速：0.8 mL/min；进样量：20uL。

②检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长200nm。

3．标准曲线的制作及试样测定：

将标准系列工作液分别在上述色谱条件下测定相应的峰面积(峰高)，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积(峰高)为纵坐标绘制标准曲线。

在相同的液相色谱条件下，将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。

(四)结果计算

式中X—试样中阿斯巴甜或阿力甜的含量，g/kg;

P—由标准曲线计算出进样液中阿斯巴甜或阿力甜的浓度，ug/mL ;

k—试样的最后定容体积，mL;

m—试样的质量，g；

1000—由ug/g换算成g/kg的换算因子。

结果保留3位有效数字。精密度要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。

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文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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