6 试样制备与保存

6.1 试样的制备

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器，密封，并标明标记。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2 试样的保存

将试样于-18℃冰箱中保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL聚丙烯离心管中，加入内标标准中间液(4.14)75.0uL,加入25 mL乙酸乙酯,0.75 mL氨水(4.4)，3g无水硫酸钠，匀浆提取30 s,4000r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中。另取一50 mL离心管加入20 mL乙酸乙酯,0.60 mL氨水，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移入第一支离心管中．用玻棒搅动残渣，旋涡振荡提取1 min，超声波振荡提取5 min,4000 r/min离心5 min，上清液合并至50mL比色管，乙酸乙酯定容至50.0 mL。摇匀后移取10.0 mL乙酸乙酯提取液于25 mL鸡心瓶,45℃减压旋转浓缩至干。

7.2 净化

鸡心瓶中的残渣用2.00mL水溶解,旋涡振荡混匀，超声5 min，加入3 mL正己烷旋涡振荡混合30 s，静置分层,弃掉上层的正己烷,再加3mL正己烷旋涡振荡混合30 s，静置分层，移取部分下层的水相于1.5 mL的聚丙烯离心管中,13000r/min离心5 min，经0.2 un滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考。另吸取100uL滤液于液相进样瓶，加入400uL水，混匀，供液相色谱-串联质谱测定氟苯尼考铵。

7.3 空白基质溶液的制备

称取5g空白样品，情确至0.01g,诊不加入内标标准中间液，其他按7.1和7.2步骤操作。

7.4 测定条件

7.4.1 液相色谱参考条件

7.4.1.1 氯霉素、甲砚霉素和氟苯尼考测定

a)色谱柱：SUPELCO Discovery C₁₈,5um，150 mm×2.1mm(内径)或相当者；

h)柱温：40℃；

c)流动相：甲醇-水(2+3)；

d)流速：0.30 mL/min；

e)进样量：20 uL。

7.4.1.2 氟苯尼考胺测定

a)色谱柱：Intersil C₈-3,5 um,150 mm×4.6mm(内径)或相当者；

b)柱温：40℃；

c)流动相：甲醇-水(4+1);

d)流速：0.30 mL/min;

e)进样量：10uL。

7.4.2 质谱参考条件

a)离子源：电喷雾离子源(ES1);

b)扫描方式：负离子扫描(氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考测定)，正离子扫描(氟苯尼考胺测定)：

c)检测方式：多反应选择离子检测(MRM);

由电喷雾电压(IS): -4200V(氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考测定)，4500V(氟苯尼考胺测定)；

e)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；

f)辅助气温度(TEM) : 600℃；

g)定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表1。

表1 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氘代氯霉素(d₅-氯霉素)和氟苯尼考胺的质谱参数

相关链接：河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲讽霉素和氟苯尼考残留量的测定（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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