2．猪油样品

1999年初江西赣南、定南两县发生了一起严重的食物中毒事件，其中的污染猪油得到了详尽的分析测定，研究采用的方法为直接格林试剂衍生法。由于格林试剂在含有活泼质子的环境中易于被破坏，从而丧失烷基化试剂的特性，因而在常规环境样品处理时，必须将被分析物预先萃取转移到不含活泼H⁺的有机溶剂中，而后进行浓缩衍生。然而由于猪油样本的特殊性，即不含活泼质子，所以使格林试剂直接与样品进行衍生反应成为可能，这样可避免有机溶剂萃取的步骤。然而，由此获得的衍生样品，净化过程非常重要，因为样品中含有大量基质复杂的猪油成分，这种末净化的样品如直接进行色谱分析将导致气相色谱柱的严重污染和柱效降低。对于生物样品的净化处理，通常采用弗罗里硅土，它可有效清除被分析样品中的有机杂质，从而获得符合气相色谱分析检测纯度的样品。基干预实验发现，污染猪油中主要富含甲基锡化合物，因此研究选用了戊基化格林试剂，这使衍生后的产物在常规的气相色谱中更容易与所用溶剂环己烷分离。整个实验处理过程为：适量猪油样品，用少量环己烷溶解，加入1mL 2ug·mL^-1 McSn(n-Pr)₃内标物，混匀后用0.8mL 2.0mol·L^-1(n-Pe)MgBr密闭超声反应15min，于冰水浴中缓慢滴入4mL 0.5mol·L^-1 H₂SO₄，振摇去除过量格林试剂，用约60mL去离子水洗涤有机层，将有机相转移至一预先以5mL环己烷淋洗过的弗罗里硅土(0.8mg)-无水硫酸钠(0.2mg)短柱(0.5cm×4.5cm)上净化干燥，并以环己烷淋洗至滤出液为10mL，所得样品以GC-FPD或GC-MS测定，有机锡化合物的GC-FPD色谱图如图11-4所示，甲基锡与无机锡戊基化衍生产物的GC-MS分析质谱图如图11-5所示。通过在一个典型猪油样本中加入一甲基锡、二甲基锡和三甲基锡标准化合物，所得到的加标回收率均高达95％,由此可见该定量方法的可靠性。实验结果表明，所测污染猪油中含多种有机锡化合物，尤其以二甲基锡含量最高，达mg·g^-1水平，为主要污染物。

3．血样与尿样

针对来自赣南猪油中毒事件中中毒病人的血样、尿样，由于样品基质以水为主，因此其处理过程与水样分析相似，其中包括有机溶剂萃取、格林试剂衍生、弗罗里硅土-无水硫酸钠净化干燥以及GC-FPD检测。具体操作过程如下：取2mL尿样或0.40g搅匀的全血样置于一分离瓶中，以5mL磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调pH为5.加入2mL 80ng·mL^-1 McSn(n-Pr)₃内标溶液，混匀后，以2.5mL 0.1％ tropolone-环己烷溶液超声萃取15 min，离心转移上层有机相，剩余物再以等量上述有机溶液萃取一次。合并两次萃取液并以无水硫酸钠干燥后，再经戊基化衍生、净化并干燥处理后，进行GC-FPD检测，结果见图11-4。分析结果表明尿样中含有ng·mL^-1平的二甲基锡与二甲基锡，血样中含有ng·g^-1水平的二甲基锡。

图11-4 戊基化标准锡化合物与一些样品的GGFPD谱图比较
a-标准锡的戊基化衍生物；b-定南3油样；c-油店油样；d-中毒病人血样；
e-中毒死者肾脏；f-2号中毒病人尿样；1-溶剂；2-三甲基锡；3-甲基三丙基锡(内标)；
4-二甲基锡；5-甲基锡；6-无机锡；7-二辛基锡；8-未知化合物1；9-未知化合物2

图11-5


图11-5 各有机锡化合物EI质谱图

4. 内脏样品

在赣南猪油污染事件中，3人食物中毒死亡，针对死者的心脏、肝脏、胃以及肾脏样本同样进行了相应的分析检测。实验采用常规生物样本有机锡分析的前处理过程，也就是加入一定消化试剂对生物组织进行预先消解，例如硫酸可消化有机样本，这样可溶解无机颗粒(碳酸盐、硫化物)，从而释放被它们结合的有机锡。另外由干火焰光度检测器对硫化物敏感，所以可通过加入CuSO₄溶液形成CuS沉淀来去除 S^2-干扰。加入KBr可增加水溶液的离子强度，有助于分析物被有机溶剂更好地萃取。本研究各内脏样品的处理方法如下：取0.4～0.8g(湿重)中毒死者或非中毒死者内脏样(分别为胃、肝、肾及心脏)置于一10mL具塞离心管中，加入2mL 80ng·mL^-1 McSn(n-Pr)₃内标溶液，混合均匀平衡后，样品由2mL KBr-H₂SO₄溶液(由90g KBr与27.5 mL浓H₂SO₄溶于200mL去离子水中配制而得)与0.5mL、1mol·L^-1 CuSO₄溶液在强烈振摇下消化15min，再以5mL，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调pH为5，后续萃取衍生步骤同尿样或血样的处理方法。样品经净化干燥后，由气相色谱分离与FPD检测，其谱图如图11-4所示。实验结果显示，中毒死者内脏中含有ug·g^-1水平的甲基锡化合物。

相关链接：有机锡化合物衍生技术（一）

文章来源：《环境样品前处理技术》

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